在农业生产研究上，常常需要进行微生物的培养和计数。

(1) 下图是利用____________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。

 (2) 分析下面培养基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O。若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述_______成分，并加入______物质，以补充______源。若用于培养纤维素分解菌，应加入________物质，为检测纤维素分解菌的存在与否，还应加入_______染料，含纤维素分解菌将形成__________圈。

根据各类微生物的形态结构特点和新陈代谢类型，利用选择培养基和鉴别培养基，结合显微镜镜检以及菌落特征，可以把混杂在一起的大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、圆褐固氮菌、尿细菌、纤维杆菌分离开来。下面是分离筛选的方法步骤，请根据各个步骤的条件，填写空格中的内容：

首先配制一系列不同性质的固体培养基，然后进行高温灭菌。再将上述微生物的混合液分别接种到各种培养基上培养。

(1)利用无氮培养基可筛选出________________。

(2)用不含有机碳源的选择培养基可筛选出_________________.

(3)酵母菌的筛选需要在常规培养基中另加人_______________。

(4)用含较高浓度NaCl的培养基可选择出________________。

(5)利用伊红一美蓝培养基培养混合菌，菌落呈黑色是____________，挑取该菌落单独培养，结合显微镜镜检和进一步用伊红——美蓝鉴别培养基来确定。

(6)在无氧环境下培养混合菌，同时加入一定浓度的乳酸，使培养基pH充分降低，利用菌落特征，结合显微镜镜检，选取生长优势的菌落，即可分离出________________。

(7)利用碳源为纤维素的液体培养基可筛选______________________。

(8)若筛选尿细菌，则配制的培养基特点是________________________。初步筛选后为了进一步验证分解尿素的细菌是否存在，常用的方法是        。

(9)在上述实验接种时可采用平板划线法，操作结束为什么仍需要灼烧接种环？                                                           。

（一）、为了获得植物次生代谢产物,先用植物外植体获得愈伤组织,然后在液体培养基中悬浮培养。 请回答下列问题:

(1)外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为               。

(2)在愈伤组织悬浮培养时,细胞干重、蔗糖浓度和 pH 的变化如右图所示。 细胞干重在 12 d 后下降的原因有            ;培养液中蔗糖的作用是            、             。

(3)多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。 二倍体愈伤组织细胞

经              处理,会产生染色体加倍的细胞。 为检测愈伤组织细胞染色体数目,压片前常用纤维素酶和           酶解离愈伤组织。 若愈伤组织细胞(2n)经诱导处理后,观察到染色体数为8n 的细胞,合理的解释是                     、                    。

（二）、为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。

该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为             。

请据图回答问题

（1）培养基中加入尿素的目的是          ，这种培养基属于          培养基。

（2）此培养基         （选填“能”或者“不能”）用于植物组织培养，理由是该培养基中                            。

（3）“目的菌”生长所需的碳源和氮源分别来自培养基中的          和         。

（4）为充分说明上表所示培养基具有选择作用，应配置              培养基作为实验对照，如果该培养基上的菌落数明显         （选填“多于”或“少于”）表中培养基中的菌落数目，说明表中培养基已筛选出一些目的菌。

（5）图中过程统计的菌落数往往比活菌的实际数目      （选填“低”或“高”），原因是                                       。

（6）对分离的菌种进行鉴定时，需要在上述培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的                    将尿素分解为氨，pH增高，使指示剂变          

(1)显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用________染色。

(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养。

(3)若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用____________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用________法进行计数。

(4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35 ℃、40 ℃、45 ℃温度下降解10 g油脂所需酶量依次为4 mg、1 mg、6 mg，则上述三个温度中，________℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕________℃设计后续实验。

(1)从此培养基的配方来看，最适合培养下列哪种微生物？
A．酵母菌                                      B．硝化细菌

C．纤维素分解菌                             D．大肠杆菌

(2)微生物培养的培养基按照用途可以分为        和________，两种培养基的配方中一般都含有水、无机盐、________和________，培养基还需要满足微生物生长对特殊营养物质（如生长因子等）、________以及氧气的要求。

(3)稀释涂布平板法是微生物接种常用的方法之一，该法是将菌液进行________，然后将不同稀释度的菌液分别涂布在琼脂固体培养基的表面，进行培养。稀释条件足够时，可形成由单个细胞形成单个      ，因此可用于微生物的                                          。

(4)如果要进行土壤中分解尿素的细菌的分离，培养基中必须含有的成分是________，验证分解尿素的细菌是否存在，常用的方法是                                 。

(5)微生物接种的方法很多，在用平板划线法操作结束时，为什么仍需要灼烧接种环？
_________________________________。

 （1）此培养基能否用于植物组织培养？_________________________________________________，理由是___________________________________________________________.
（2）培养基中加入尿素的目的是　　　　　　　　，这种培养基属于　　　　　　　　培养基。
（3） “目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的　　　　和　　　　　　　　，实验需要振荡培养，原因是___________________________。

（4）转为固体培养时，常采用　　　　　　　　（方法）接种，获得单菌落后继续筛选。

（5）在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有　　　　　　　　（填序号）。

①由于土样不同　②由于培养基污染　③由于操作失误

④没有设置对照

（6）在以尿素为唯一氮源的培养基中加入　　　　，细菌合成的　　　　将尿素分解为氨，pH增高，使指示剂变红色。

（7）某同学在稀释倍数为10⁶的培养基上测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL）__________________________。

(1)某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以         为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于        培养基。配制培养基的操作步骤是                              （用箭头和字母按顺序回答）。

         a．倒平板    b．计算    c．溶化    d．称量    e．灭菌

(2)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、____________和________________。无菌技术要求实验操作应在                附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。

(3)该同学在稀释倍数为10⁶的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌株数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL)__________。用这种方法测得的数量比实际活菌数要____，因为                                         。

（4）除上述方法外纯化菌种时还可以采用          法接种，操作的第一步及每次划线之前都要                。接种完成后应将培养皿倒置并放在             中培养，若不倒置培养，将导致                      。

(5)实验结束后，使用过的培养基应该进行        处理后，才能倒掉。

(4)土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶，分离该类细菌的培养基应以________为唯一氮源，计数时一般选择菌落数在________范围的平板进行计数，统计的结果往往比活菌实际数目________，其原因是________________________．一般说来，在一定的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，这些特征包括菌落的________等(至少答出两个方面)

(1)自然界中纤维素的来源是____________________________。它是________的基本组成成分。纤维素酶能使布料柔软的原因是____________________________________________________________________________________________________________________（2分）。

(2)某研究性学习小组同学，为了从土壤中筛选纤维素分解菌，利用下列材料和用具进行了实验，请完善下列实验步骤。

材料用具：采集的土样，研钵，配制纤维素分解菌培养基的各种原料，琼脂，纤维素粉，刚果红溶液，培养箱，无菌水。

实验步骤：

①利用培养纤维素分解菌培养基的各种原料、琼脂及_______（2分）配制固体培养基，灭菌。

②将采集的土壤样品在研钵中研碎后________，制成土壤匀浆。

③利用无菌操作方法把土壤匀浆________到培养基上，放在培养箱内培养一段时间。

④用显微镜观察纤维素分解菌时，要从________挑取材料制成临时装片。

(3)在用稀释涂布平板计数法对纤维素分解菌数目进行统计时，统计的菌落数往往比活菌的实际数低，这是因为______________________________________________ ____________________________________________________________________（2分）。

(4)如果探究温度对纤维素酶活性的影响，自变量是________，应该保持________（2分）等不变(至少答两项)。