[生物——选修1：生物技术实践]

新鲜的泡菜滤液中含有乳酸菌，可作为实验材料分离纯化乳酸菌。请回答下列问题：

（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行________，这样做的理由是________。

（2）分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，从而使培养基在分离纯化过程中会形成________。

（3）若要长期保存乳酸菌，菌液中常需要加入一定量的________（填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”），且要放置在________（填“－5”“－20”或“－100”）℃的冷冻箱中。若要短期保存乳酸菌，可将菌种接种到试管的________（填“溶液中”“固体培养基表面上”或“固体斜面培养基上”），菌落长成后，将试管放置在________（填“－4”“0”或“4”）℃的冰箱中保藏。

人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃,可用来发酵处理秸秆,提高秸秆的营养价值。

为了增强发酵效果,研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株,并对其降解纤维素能力进行了研究。 请回答下列问题:

(1)在样品稀释和涂布平板步骤中,下列选项不需要的是     (填序号)。

①酒精灯 ②培养皿 ③显微镜 ④无菌水

(2)在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是                        。

(3)向试管内分装含琼脂的培养基时,若试管口粘附有培养基,需要用酒精棉球擦净的原因是   。

(4)刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落(见下图)。 图中降解圈大小与纤维素酶的       有关。 图中降解纤维素能力最强的菌株是           (填图中序号)。

(5)研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4,在不同温度和pH条件下进行发测得发酵液中酶活性的结果见下图,推测菌株       更适合用于人工瘤胃发酵,理是                         。

将没有吃完的西瓜，盖上保鲜膜后放入冰箱，是很多人日常储藏西瓜的办法。但事实上，有时候盖上保鲜膜储藏的西瓜中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液，研究细菌的种类和数量。

(1)该研究小组需配制用于培养微生物的培养基，配制的培养基一般都含有水、碳源、          和         。一般采用            法对培养基进行灭菌。

(2)为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板           (填“正置”或“倒置”)。为了观察浸出液中微生物的种类和数量，采用          法接种。接种时，为了避免环境中微生物的污染，实验操作应在         附近进行。

(3)在培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明西瓜的浸出液中有                    （填“一种”或“多种”）细菌。细菌总数越多，说明西瓜被细菌污染的程度越         （填“高”或“低”）。

絮凝性细菌分泌的具有絮凝活性的高分子化合物，能与石油污水中的悬浮颗粒和有机物等形成絮状沉淀，起到净化污水的作用。为进一步提高对石油污水的净化效果，将絮凝性细菌和石油降解菌融合，构建目的菌株。其流程图如下,据图回答：

（1）溶菌酶的作用是_________________________。

（2）PEG的作用是_________________________。

（3）经处理后，在再生培养基上，未融合的A、B难以生长。图中AB融合菌能生长和繁殖的原因是_______________________________。

（4）目的菌株的筛选：筛选既能分泌具有絮凝活性的化合物，又能在含有_________的培养基上生长的AB融合菌，选择效果最好的最为目的菌株。

（5）为探究目的菌株不同发酵时间发酵液的絮凝效果，将目的菌株进行发酵培养，定时取发酵液，加入石油污水中：同时设置________________为对照组。经搅拌、静置各3分钟后，分别测定上层水样的石油浓度COD值（COD值越高表示有机物污染程度越高）,计算石油去除率和COD去除率，结果如下图。

（6）目的菌的种群增长曲线是_____________型。在40～44小时，发酵液对石油污水的净化效果最好，其原因是_________________。

（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、___________________四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是________________________________________________________________。

（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是____________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有___________________________________________________________。

（3）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_____              

苹果酒、苹果醋、苹果汁等是人们餐桌上的常见食品。请结合相关知识回答以下问题： 

（1）如图所示是在苹果酒的基础上制作苹果醋的流程图。

过程②常用的发酵菌是               ，可以在食醋中获得，分离和纯化该微生物的方法如下：第一步：配制培养基。根据物理性质，培养微生物常用的培养基为                     。 

第二步：采用                  法对培养基进行灭菌处理。

第三步：                              。

第四步：培养温度控制在                。

第五步：挑选符合要求的菌落。

（2）某同学计划统计食醋中该发酵菌的总数，他选用10^－4、10^－5、10^－6稀释液进行涂布，每种稀释液都设置了3个培养皿。从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是              ，此对照实验的目的是证明              过程中是否被杂菌污染。

（3）苹果泥与果胶酶混合能提高苹果的出汁率并使浑浊的果汁变澄清，其原因是                                   。

将没有吃完的西瓜，盖上保鲜膜后放入冰箱，是很多人日常储藏西瓜的办法。但事实上，有时候盖上保鲜膜储藏的西瓜中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液，研究细菌的种类和数量。

(1)该研究小组需配制用于培养微生物的培养基，配制的培养基一般都含有水、碳源、          和         。一般采用            法对培养基进行灭菌。

(2)为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板           (填“正置”或“倒置”)。为了观察浸出液中微生物的种类和数量，采用          法接种。接种时，为了避免环境中微生物的污染，实验操作应在         附近进行。

(3)在培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明西瓜的浸出液中有                    （填“一种”或“多种”）细菌。细菌总数越多，说明西瓜被细菌污染的程度越         （填“高”或“低”）。