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            • 1. 天然漆酶在造纸业中常作为漂白助剂使用,但天然漆酶的稳定性较差,在应用环境条件下易失活,某研究小组采用PA、SA、MA三种化学试剂对天然漆酶进行修饰,研究酶热稳定性的变化情况。请分析回答:
              (1)漆酶可以催化木质素的降解,不能催化纤维素的降解,这表明酶具有                         

              (2)下图1表示不同温度下漆酶对纸浆中两种染料的漂白效果的差异,漂白效果最适的温度是          ,   60℃时两条曲线重合的原因是            


              (3)采用PA、SA、MA三种化学试剂对天然漆酶进行修饰,实验如下:

              步骤

              A

              B

              C

              D

              天然漆酶

              Pa修饰酶

              SA修饰酶

              Ma修饰酶

              1

              加酶液

              0.5mL

              0.5mL

              0.5mL

              0.5mL

              2

              加缓冲液

              lmL

              lmL

              lmL

              lmL

              3

              加底物

              lmL

              lmL

              lmL

              lmL

              4

              条件控制

              分别置于50℃的水浴中,每隔lh取样,冰浴冷却 至0℃后,测定酶活力(天然漆酶活力记为100%)。

              步骤2中加缓冲液的目的是                          ,步骤4中冰浴的目的是                      实验结果如上图2所示,可以看出:50℃条件下,三种化学修饰                         (填“都能提高”或“都不能提高”或“部分提高”)酶的热稳定性。

              (4)根据上述实验分析,酶制剂                   (填“能”或“不能”)在最适温度下长期保存,原因是:                                        

            • 2.

              工业生产果汁时,常常利用果胶酶破除果肉细胞的细胞壁以提高出汁率。为研究温度对果胶酶活性的影响,某学生设计了如下图所示的实验:


              ①将果胶酶与苹果泥分装于不同的试管,在10 ℃水浴中恒温处理10 min(如图A)。

              ②将步骤①处理后的果胶酶和苹果泥混合再次在10 ℃水浴中恒温处理10 min(如图B)。

              ③将步骤②处理后的混合物过滤,收集滤液,测量果汁量(如图C)。

              ④在不同温度条件下重复以上实验步骤,并记录果汁量,结果如下表:

              温度/℃

              10

              20

              30

              40

              50

              60

              70

              80

              果汁量/mL

              8

              13

              15

              25

              15

              12

              11

              10

              根据上述实验,请分析并回答下列问题:

              (1)果胶酶能破除细胞壁,是因为果胶酶可以促进细胞壁中_________的水解。

              (2)实验步骤①的目的是_______________________________。

              (3)实验步骤中要有玻璃棒搅拌的操作,其目的是使__________,以减少实验误差。

              (4)实验结果表明,在上述8组实验中,当温度为________时果汁量最多,此时果胶酶的活性________。当温度再升高时,果汁量降低,说明________________。

              (5)能不能确定该温度就是果胶酶的最适温度?如果不能,请设计出进一步探究果胶酶的最适温度的实验方案:______________________________________。

            • 3.

              天然漆酶在造纸业中常作为漂白助剂使用,但天然漆酶的稳定性较差,在应用环境条件下易失活,某研究小组采用PA、SA、MA三种化学试剂对天然漆酶进行修饰,研究酶热稳定性的变化情况。请分析回答:

              (1) 漆酶可以催化木质素的降解,不能催化纤维素的降解,这表明酶具有____。 

              (2) 下图1表示不同温度下漆酶对纸浆中两种染料的漂白效果的差异,漂白效果最适的温度是___,60 ℃时两条曲线重合的原因是___________________。 

              图1图2


              (3) 采用PA、SA、MA三种化学试剂对天然漆酶进行修饰,实验如下:

                    分组

              步骤      

              A

              B

              C

              D

              天然漆酶

              PA修饰酶

              SA修饰酶

              MA修饰酶

              1

              加酶液

              0.5 mL

              0.5 mL

              0.5 mL

              0.5 mL

              2

              加缓冲液

              1 mL

              1 mL

              1 mL

              1 mL

              3

              加底物

              1 mL

              1 mL

              1 mL

              1 mL

              4

              条件控制

              分别置于50 ℃的水浴中,每隔1 h取样,冰浴冷却至0 ℃后,测定酶活力(天然漆酶活力记为100%)


              步骤2中加缓冲液的目的是_________,步骤4中冰浴的目的是__________。 

              实验结果如上图2所示,可以看出:50 ℃条件下,三种化学修饰______(选填“都能提高”“都不能提高”或“部分提高”)酶的热稳定性。 

              (4) 根据上述实验分析,酶制剂____(选填“能”或“不能”)在最适温度下长期保存,原因是___________________。 

            • 4.
              嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶(BglB)是一种耐热纤维素酶,为使其在工业生产中更好地应用,开展了以下试验:
              Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶
              (1)PCR扩增bglB基因时,选用 ______ 基因组DNA作模板.
              (2)图1为质粒限制酶酶切图谱.bglB基因不含图中限制酶识别序列.为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒,扩增的bglB基因两端需分别引入 ______ 和 ______ 不同限制酶的识别序列.
              (3)大肠杆菌不能降解纤维素,但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力,这是因为 ______ .
              Ⅱ.温度对BglB酶活性的影响

              (4)据图2、3可知,80℃保温30分钟后,BglB酶会 ______ ;为高效利用BglB酶降解纤维素,反应温度最好控制在 ______ (单选).
              A.50℃B.60℃C.70℃D.80℃
              Ⅲ.利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性
              在PCR扩增bglB基因的过程中,加入诱变剂可提高bglB基因的突变率.经过筛选,可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因.
              (5)与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比,上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高,其原因是在PCR过程中 ______ (多选).
              A.仅针对bglB基因进行诱变     B.bglB基因产生了定向突变
              C.bglB基因可快速累积突变    D.bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变.
            • 5.
              某科研小组开展紫外线诱变选育脂肪酶高产菌株的研究.原始菌株1444粗壮假丝酵母经连续两次紫外线诱变,反复筛选,得到的突变株Z6和Z8.在40℃、pH 7.5条件下测定所产脂肪酶活性,分别比原始菌株提高了l26%、150%.回答下列问题:
              (1)由于突变是不定向,突变导致脂肪酶活性变化的可能结果有 ______ .
              (2)科研人员对上述三个菌株所产生的脂肪酶特性进行研究,获如下结果

              实验一:为测定脂肪酶在不同pH值条件下的稳定性,科研人员分别取上述三种菌株所产的酶液各20mL,分别与等体积的pH5~9的缓冲液混匀,置于4℃冰箱保存24小时后,将pH调至7.5,再加入等量的底物溶液,测定酶的相对活性.结果如图,与原始菌株1 444相比,z6和z8的酶在不同pH条件下的 ______ .测定酶的活性的实验温度为 ______ ℃.
              (3)实验二:分别取上述三种菌株的酶液各20ml,置于50℃恒温水浴处理60min,每隔10min取样一次,测定酶活性,同时测定三个对照组的酶活性并进行比较.本实验目的是 ______ ,对照组所用的酶液应如何处理? ______ .
            • 6.
              为了比较甲、乙、丙三种微生物所产生的淀粉酶的活性,某生物兴趣小组以三种微生物提取液(提取液中淀粉酶浓度相同)为材料进行了如下实验:
              试管1 试管2 试管3 试管4
              实验操作 蒸馏水(mL 2 2 2 A
              pH=8缓冲液 0.5 0.5 0.5 0.5
              淀粉溶液(mL) 1 1 B 1
              甲生物提取液(mL) C
              乙生物提取液(mL) D
              丙生物提取液(mL) E
              37℃的水浴,保温1小时
              总体积(mL) 3.8 3.8 3.8 3.8
              滴加等量的碘液
              实验结果 颜色深浅程度 ++ - + F
              注:“+”显色,“+”越多显色越深;“-”不显色
              (1)F的颜色深浅程度为 ______ (用“+”或“-”表示).
              (2)该实验的自变量是 ______ ;温度属于无关变量,保持相同即可,该说法是 ______ (填“对”、“错”)的.
              (3)生物体内酶的化学本质是 ______ ,其特性有 ______ 、 ______ .
            • 7.

              研究酶的化学性质和作用机理,有助于了解生命活动的规律并指导生产和生活实践。 请回答下列问题:

              (1)甲、乙两种酶用同一种蛋白酶处理,酶活性与处理时间的关系如图1所示。甲酶的化学本质最可能是          

              (2)在实际生产中,固定化细胞技术实质上固定的是         。制备固定化酵母细胞时,常用的方法是下图2中[  ]         (填数字序号及名称)。




              (3)在生活实践中,酶制剂在洗衣粉中被广泛应用。某研究性学习小组为探究某品牌洗衣粉中酶催化作用的最适温度,设计了如下装置进行实验,并将结果用曲线图A、B表示(如图3)。


              ①使用该加酶洗衣粉的最适宜温度为                

              ②在0℃和75℃时,酶的催化效率基本都为零。但当温度再度恢复到45℃时,后者酶的催化能力已不能恢复,这是因为                                    

              (4)在现代生物工程中,可用酶在体外处理“蛋白质-DNA复合体”以获得包裹在蛋白质中的DNA片段信息,过程如图4所示。


              ①a、b过程中,酶作用的部位依次是                         

              ②若将获得的DNA片段用PCR技术进行扩增,与细胞内的DNA复制过程相比,利用PCR技术扩增DNA时所需酶的不同之处是                                          

            • 8. (12分)[生物――生物技术实践]


              乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖,具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下:

              产乳糖酶微生物L的筛选 产乳糖酶微生物L的培养 乳糖酶的提取纯化 乳糖酶的固定化

              (1)筛选产乳糖酶的微生物L时,宜用          作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是            。从功能上讲,这种培养基属于              。 

              (2)培养微生物L前,宜采用            方法对接种环进行灭菌。 

              (3)纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下,带电荷相同的蛋白质电泳速度越快,说明其分子量越              。 

              (4)乳糖酶宜采用化学结合法(共价键结合法)进行固定化,可通过检测固定化乳糖酶的            确定其应用价值。除化学结合法外,酶的固定化方法还包括                             、离子吸附法及交联法等。

            • 9. 我国食品加工企业每年都会产生大量高浓度有机废水,如直接排放会造成严重污染.固定化酶技术可应用于高浓度有机废水的处理,科研人员对固定化蛋白酶进行了以下实验研究.
              实验一:研究人员选择了硅胶、活性炭和大孔树脂为载体制备固定化蛋白酶,三种载体的固定化率如图1所示.
              实验二:为探究pH对三种载体固定化酶活性的影响.研究人员将高浓度污水的pH值分别调至4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0,各取500ml.分别使其与等量不同载体的固定化酶混合,然后在37℃的水浴中反应6小时.测定每个反应器中氨基酸的生成速率.测定结果如图2所示.据图回答下列问题:

              (1)由图1可知,三种载体蛋白酶固定化率最低的是______.与水溶性酶相比,固定化酶处理高浓度污水的优点是______.
              (2)实验二的自变量是______,无关变量是______.(至少写两点)
              (3)从图2中可得出的结论:______;______.
              (4)结合图1和图2分析,进行高浓度污水的净化时应选择______载体的固定化酶.
            • 10. 工业生产果汁时,常常利用果胶酶破除果肉细胞壁以提高水果的出汁率,为研究温度对果胶酶活性的影响,某同学设计了如下实验:

              Ⅰ.将果胶酶与苹果泥分装于不同试管,在10℃水浴中恒温处理10min(如图甲).
              Ⅱ.将步骤Ⅰ处理后的果胶酶和苹果泥混合,再次在10℃水浴中恒温处理10min(如图乙).
              Ⅲ.将步骤Ⅱ处理后的混合物过滤,收集滤液,测量果汁量(如图丙).
              Ⅳ.在不同温度条件下重复以上实验步骤,并记录果汁量,结果如下表:
              根据上述实验,请分析回答下列问题.
              (1)果胶酶能破除细胞壁,是因为果胶酶可以分解细胞壁中的果胶,产物是______.
              (2)实验结果表明,当温度为______左右时,果汁量最多,此时果胶酶的活性______.本实验是否设置了对照实验______(“是”或“否”)
              (3)为什么该实验能够通过测定滤出的苹果汁的体积大小来判断果胶酶活性的高低?______.
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