人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白,可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下:

(1)htPA基因与载体用 切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用      技术。 

(2)为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射 ，使其     。采集的精子需要经过 才具备受精能力。 

(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是     。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行 。在胚胎移植前，通过 技术可获得较多胚胎，这体现了早期胚胎细胞的 。 

(4)若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到 ，说明目的基因成功表达。 

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因,BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答:

(1)获取目的基因的主要途径包括从自然界已有的物种中分离和                        。

(2)获取目的基因还可以使RNA 形成cDNA。获得目的基因可以通过            技术大量扩增。图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时切割载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含                         的培养基上进行。 

(3)图中质粒除了所示结构以外，还必须含有 才能构成一个完整的基因表达载体。能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是图中的         。 

(4)过程①可采用的操作方法是 。 ②过程表示        。 

(5)为检测人乳铁蛋白是否成功表达,可采用               技术。 

(选修三)毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIFⅡ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

(1)过程①中最常用的运载工具是　　　　,所需要的酶是限制酶和　　　　。

(2)在过程②中,用　　　　处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中,将成纤维细胞置于5% CO₂的气体环境中,CO₂的作用是　　　　　。

(3)在过程③中,用　　　　处理以获取更多的卵(母)细胞。成熟卵(母)细胞在核移植前需要进行　　　　处理。

(4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是　　　　。在胚胎移植前,通过　　　　技术可获得较多胚胎。

（选修一）从自然菌样筛选较理想的生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从　　　　　　　环境采集。

（2）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其在群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择　　　　　的培养基，并在　　　　　　　条件下培养。

（3）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。 

获得图A效果的接种方法是　　　　　　　　，获得图B效果的接种方法是　　　　　　　　。

（4）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行　　　　　，接种前要进行　　　　　，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在　　　　　　　条件下进行。

以下是从自然菌群中筛选理想菌种的主要步骤，请回答：

采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定→菌种保藏

（1）在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，因此筛选嗜盐菌应从____________中分离、纯化。

（2）富集培养是在将样品稀释涂布到鉴别菌种的培养基之前，可以通过____________增加目的菌株的浓度，目的是_____________________________________________。

（3）下图所示的操作是培养基配制过程的____________，该操作的正确使用顺序是：____________（用图中的序号和箭头表示）。②步骤需要培养基冷却到____________才能操作。③步骤操作的目的是____________________________________。

（4）对获取的菌种通常是在低温条件下进行短时间保藏，也可以利用甘油管藏的方法____________。

35-2.[生物——选修3：现代生物科技专题] 

回答下列关于胚胎工程方面的问题。

（1）胚胎工程是指对动物        或         所进行的多种显微操作和处理技术，如体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。

（2）精子的顶体内含有              ，能协助精子穿过卵子的                。

（3）从供体母牛子宫内收集胚胎的方法叫          。

（4）在胚胎工程中，若要获得多个卵细胞，则需对母畜作            处理，若要出现“不同的母体产下性状相同的后代”这一现象，则应使用的技术为            。

（5）胚胎干细胞在功能上具有            性，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生            。

(1)欲从多种微生物中分离某种细菌并抑制其他微生物的生长．应使用________培养基．纯化菌种时可采用比较简单的________法进行接种，接种操作应在________进行．

(2)纯化的菌种常采用固体斜面培养基临时保藏，该方法保存的时间较________，而且菌种易________．常用的凝固剂是________．

(3)从培养基所含的成分来看，从土壤中分离出固氮菌的培养基特点是________，从土壤中分离出纤维素分解菌的培养基特点是________．

（二）人组织纤溶酶原擞活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

(1)卵母细胞可以从活体________中采集，还可从已处死的雌羊卵巢中获取．对供体母羊用________处理，可以获取更多的卵(母)细胞．采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力．

(2)欲用有限的早期胚胎获得多个转基用个体，可以利用________技术．由于代孕母羊对移入其子宫的外来胚胎________，才使早期胚胎能在代孕母羊体内存活．

(3)质粒上应有________，才能使htPA基因插入其中．在转htPA基因母羊的肌肉细胞中________(能、不能)检测到目的基因．若在其羊乳中检测到________，说明目的基因成功表达．

MRSA菌是一种引起皮肤感染的“超级细菌”，对青霉素等多种抗生素有抗性。为研究人母乳中新发现的蛋白质H与青霉素组合使用对MRSA菌生长的影响，某兴趣小组的实验设计及结

果如下表。

请回答下列问题：

(1)青霉素的用量是该实验的________变量。应保持________，目的是________。

(2)第2组和第3组对比表明MRSA菌对________有抗性，________能杀死MRSA菌。

(3)蛋白质H不是新型抗生素，理由是________。

(4)测定培养液中MRSA菌的活菌数量，不宜在显微镜下用________直接计数，适合选用________法进行计数，原因是________直接计数获得的结果包含活的MRSA菌和死的MRSA菌的总数，而用涂布法进行计数，计数的是菌落数，一个菌落一般来源于稀释液中的一个活菌。

40 [生物一选修3  现代生物科技专题]

下图为培育转基因山羊生产人β酪蛋白的流程图。

请回答下列问题：

(1)获取过程①所用的人β-酪蛋白基因时，可先提取人体细胞中的________，以其作为模板，在________的作用下台成________。

(2)重组人β-酪蛋白基因表达载体中必须有启动子，是________识别和结合的部位。

(3)过程②可选用________阶段的胚胎进行移植。

(4)过程③可使用________技术扩大转基因山羊群体，除此之外，还可以采取的措施有________。

(5)过程④人β-酪蛋白基因在细胞内表达的场所为________。

(一)请回答与“泡菜的腌制”实验有关的问题：

(1)腌制泡菜的基本过程是：将蔬菜、盐水、糖、白酒等放入洗净的菜坛，混合均匀。坛口加盖后用________封好。如果希望发酵快些，可将蔬菜在________中浸1分钟。加入的白酒，既可作为调味剂增加醇香感，还具有________的作用。

(2)腌制泡菜过程中起作用的微生物主要是乳酸菌和________。为了分离某种美味泡菜汁中的乳酸菌作为菌种，可将稀释后的泡菜汁用________法快速接种到平面培养基上，立即将培养皿________(A．正放于无氧培养箱 B．正放于有氧培养箱 C．倒置于无氧培养箱 D．倒置于有氧培养箱)中培养。

(二)生物工程技术为人们获得需要的生物新品种或新产品提供了便利。请回答：

人的生长激素基因重组DNA→受精卵转基因牛

抗虫基因→重组Ti质粒→细菌M棉花细胞抗虫棉

(1)在培育转人生长激素基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是________。②过程中，应对代孕母进行________处理，以便早期胚胎的着床。若在②过程中培养到早期胚胎阶段采用________技术。可培育出多头相同的转基因牛。

(2)在抗虫棉培育过程中，重组Ti质粒先导入细菌M，细菌M的名称是________，③过程中的棉花细胞常采用愈伤组织细胞而不采用叶肉细胞，原因是愈伤组织细胞________，④过程中，愈伤组织细胞可通过________技术培养成单个胚性细胞，胚性细胞再分化形成的胚状体可发育成植株。

应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：

（1）在培育转人生长激素基因牛过程中，②过程常用的方法是               ，  采用                  技术可以获得多头基因型相同的转基因牛。

（2） 转人生长激素基因牛可通过乳腺细胞分泌乳汁来生产人生长激素，在构建基因表达载体时，人生长激素基因的首端必须含有        。

A.人生长激素基因的启动子     B.牛生长激素基因的启动子

C.人乳腺蛋白基因的启动子     D.牛乳腺蛋白基因的启动子

启动子的作用是能够被____________________识别和结合，从而启动转录过程

（3）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅲ代表的细胞具有                                                       的特点。

（4）在抗虫油菜培育过程中，应将抗虫基因基因转移到Ti质粒的              上；④过程最常采用的方法是                         ；⑤过程采用的技术是                    ；在分子水平上可采用                    方法来检测转基因抗虫油菜的抗虫基因是否成功表达。

（5）下面是获取目的基因的几种方法，其中需要模板的是_______。

① 从基因组文库中获取目的基因   ② 利用PCR技术扩增目的基因  

③ 构建cDNA文库               ④ 通过DNA合成仪利用化学方法人工合成目的基因     

A．①②    B．②③    C．①③     D．①④

请依材料所给出的信息分析回答下列问题：

（1）在基因工程操作程序中，                是基因工程的核心，为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的         和       之间。

（2）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含Mg^2＋）、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、              和                 。

（3）据材料Ⅱ，在过程②中，将成纤维细胞置于5％CO₂的气体环境中，CO₂的作用是         。在过程③中，用           处理以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行          处理。

（4）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是               。在胚胎移植前，通过             技术可获得较多胚胎。

​

(1)蜘蛛丝基因能在山羊体内成功表达的原因是________，常用山羊胚胎干细胞作为受体细胞的原因是________。

(2)为提高胚胎的利用率，可对囊胚进行________获得二分胚；同时，可以通过取样________(“滋养层”、“内细胞团”)细胞进行DNA分析，用于选择雌性胚胎。将囊胚移人代孕山羊体内属于

________技术．此技术对代孕受体的要求是________。

(3)可将蜘蛛丝基因导入受精卵，使蜘蛛丝基因整合到山羊DNA中．为得到较多的受精卵，需用________处理供体雌羊。为鉴定蜘蛛丝基因是否成功表达，常用________技术进行检测。