科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞（iPS），继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠，流程如下：

（1）从黑鼠体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为             ，培养的细胞在贴壁成长至铺满培养皿底时停止分裂，这种现象称为             。

（2）图中2-细胞胚胎可用人工方法从灰鼠输卵管内获得，该过程称为             ；也可从灰鼠体内取出卵子，通过             后进行早期胚胎培养获得。早期胚胎培养的发育培养液中含有的成分是无机盐、        、氨基酸、核苷酸、维生素、激素以及         等。

（3）图中重组囊胚通过             技术移入白鼠子宫内继续发育，暂不移入的胚胎可使用             方法保存。

（4）小鼠胚胎干细胞（ES）可由囊胚的             分离培养获得。iPS与ES细胞同样具有发育全能性，有望在对人类iPS细胞进行定向           后用于疾病的细胞治疗。

根据下列有关胚胎工程的示意图，分析回答：

（1）为使A羊超数排卵，向其注射　　　　　　激素，选择　　　　　　期的卵母细胞进行体外受精；体外受精前要对B细胞进行　　　　　　处理，常用的方法是　　　　法。

（2）将早期胚胎注入D羊子宫内的技术叫　　　　　　，D羊被称为　　　　　　（填“供体”或“受体”）；为使D羊的生理状况更适合完成该技术操作，要对D羊用　　 　　　　激素进行                    处理以提高成功率。

（3）从早期胚胎分离出的ES细胞可诱导分化出不同的组织细胞，这是因为从功能上ES细胞具有　　　　　　；若取囊胚阶段的胚胎进行胚胎分割，要注意将　　　　　　均等分割；早期胚胎培养时，培养液中除营养成分外，还需加入　　　　　　。

干扰素是抗病毒的特效药，干扰素基因缺失的个体，免疫力严重下降。科学家设计了以下流程，利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失的患者进行基因治疗。根据所学的知识，结合图中相关信息，回答以下问题：

（1）上图中进行的是_________（填“体内”或“体外”）基因治疗，该过程中利用的生物工程技术手段有动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、转基因技术和_____________等。

（2）ES细胞是由早期胚胎或_____________中分离出来的一类细胞,具有_____________性，可以将其培养成人体各种组织器官。

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的_________________，该结构除了复制原点外，至少包含__________、____________、____     _和干扰素基因等；为检测干扰素基因是否表达，可以采用_____________________的方法。

Ⅰ.一种重症联合免疫缺陷病（简称SCID），这种患者缺乏正常的人体免疫功能，只要稍被细菌或病毒感染，就会发病死亡。经研究证实，SCID病人细胞的一个常染色体上编码腺苷酸脱氨酶（简称ADA）的基因ADA发生了突变。目前，人们已经找到了治疗该疾病的方案。如下图：  

（1）运载体必须具备的条件是（     ）（多选） 

A． 能在宿主细胞中复制并保存       B．具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 

C．具有标记基因，便于进行筛选    D．是环状形态的DNA分子 

（2） 在此图过程中用到的基因操作工具分别是                              。  

（3） 研究人员将ADA注入淋巴细胞，而不是其他细胞，其原因是什么？

                                                                   。 

（4）图中的治疗方法是_______基因治疗法，这是___________生物技术的应用。   

Ⅱ.下图为牛胚胎移植的基本程序，请据图回答：

（1） 图中a、b、c过程分别是指  ____________、_____________、____________。

（2） 在胚胎移植过程中，供、受体母牛选择好后，要用激素进行____________处理,这样处理的原因是供体和受体生殖器官的生理变化相同，为胚胎移入受体提供了相同的生理环境，以保证移植的胚胎能够继续正常发育。 

（3）为了提高牛胚胎的利用率，常采取的方法是_____________； 处理的时期是_________。

（4）从哺乳动物早期胚胎或原始性腺中分离出来的细胞，称为ES或EK细胞。这类细胞的形态特征有___________________。   

（1）从黑鼠体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为              ，培养的细胞在贴壁成长至铺满培养皿底时停止分裂，这种现象称为             

（2）图中2-细胞胚胎可用____________方法从灰鼠输卵管内获得，也可从灰鼠体内取出卵子，通过              后进行早期胚胎培养获得。

（3）图中重组囊胚通过              技术移入白鼠子宫内继续发育，暂不移入的胚胎可使用              方法保存。

（4）小鼠胚胎干细胞（ES）可由囊胚的              分离培养获得，iPS与ES细胞同样具有_______________特性，有望在对人类iPS细胞进行定向诱导分化后用于疾病的细胞治疗。

回答有关基因工程和胚胎工程的问题：

I .抗冻蛋白是一类抑制冰晶生长的蛋白质，能降低水溶液的冰点，从而导致水溶液的熔点和冰点出现差值，这个温度差称为热滞值。昆虫抗冻蛋白的热滞值最高，为3～ 6℃，鱼的热滞值为0.7～1.5℃。因此，昆虫抗冻蛋白在实际应用上具有更大的潜力。为了扩展一些植物的生存范围，科学家利用昆虫抗冻蛋白（AFPS）的异源表达，现已成功地提高了烟草的抗冻能力。请分析回答相关问题：

（1）基因工程的核心步骤是__________________，这一过程需要的工具酶是____________________。将AFPS基因导入烟草细胞中，常用____________法，这是因为烟草属于双子叶植物，此操作过程中使用的运载体是___________。

（2）若检测是否产生抗冻蛋白，一般采用_________方法进行分子水平的检测。

II .胚胎工程是一项综合性的动物繁育技术，可在畜牧业和制药业等领域发挥重要作用。下图是通过胚胎工程培育试管牛的过程。

（1）有时需要将早期胚胎分割，提高胚胎的利用率。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意                 ，以免影响胚胎的恢复和进一步发育。

在对囊胚阶段的胚胎做DNA分析性别鉴定时，所取的样本是          细胞。

（2）试管牛能在受体子宫中存活的生理基础是                      。

（3）胚胎干细胞培养也是一项重要的胚胎工程技术。胚胎干细胞是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的，在功能上具有           ，即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞。在体外培养条件下，为保持胚胎干细胞的未分化状态，通常在培养皿中铺上一层          细胞或培养在添加了抑制因子的培养液中。

干扰素是治疗癌症的重要药物，它必须从血液中提取，每升人血液中只能提取0.5μg，所以价格昂贵。美国加利福尼亚的某生物制品公司用如下图的方式生产干扰素。试回答相关问题。

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（1）若要使获得的转基因牛乳汁中含有人干扰素，构建的基因表达载体必须包括：乳腺蛋白基因的启动子、人干扰素基因、终止子、_________________（2分）和复制原点等。将基因表达载体导入受精卵最有效的方法是_________________。

（2）通常情况下，对供体和受体母牛选择后，要用激素进行_______________。并用___________激素对供体母牛做___________处理。

（3）为了实现干扰素的批量生产，早期胚胎进行移植之前要进行质量检测，并要求早期胚胎的性别为___________性 。可以通过取样________进行分子水平的早期胚胎性别鉴定；也可以在细胞水平上通过对________的分析进行性别鉴定。选择发育良好的___________或___________胚进行移植。为了提高胚胎利用效率， 可在这两个阶段进行___________，这可以看作动物___________（填“有性”或“无性”）繁殖的方法之一。

（4）近年来，关于胚胎干细胞的研究越来越多。胚胎干细胞具有发育的全能性，如图所示的细胞A和细胞B分别是________细胞、________细胞，可以从这些细胞中获得胚胎干细胞。

根据下列有关胚胎工程的示意图，分析回答：

（1）为使A羊超数排卵，向其注射　　　　　　激素，选择　　　　　　期的卵母细胞进行体外受精；体外受精前要对B细胞进行　　　　　　处理，常用的方法是　　　　　　法．

（2）将早期胚胎注入D羊子宫内的技术叫　　　　　　，D羊被称为　　　　　　（填“供体”或“受体”）；为使D羊的生理状况更适合完成该技术操作，要对D羊进行　　　　　　处理以提高成功率．

（3）从早期胚胎分离出的ES细胞可诱导分化出不同的组织细胞，这是因为从功能上ES细胞具有　　　　　　；若取囊胚阶段的胚胎进行胚胎分割，要注意将　　　　　　均等分割；早期胚胎培养时，培养液中除营养成分外，还需加入　　　　　　．

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的     　　　   。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到      　　 期时， 可从其内细胞团分离出ES细胞。

（3）步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体。可以根据Rag₂基因的           设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有       　　　　　　　　　  酶的酶切位点。

（4）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的   　　    ，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验。

⑴对猪基因组进行改造，可以选择某种有调控作用的目的基因，重组后导入受体细胞，以达到抑制猪抗原决定基因             的目的。进行 DNA重组时需要使用的工具酶是                                               。

⑵选择猪胚胎干细胞作为受体细胞，胚胎干细胞是由              或            中分离出来的一类细胞。将目的基因导入后，利用标记基因的作用               含有目的基因的受体细胞。

⑶将含目的基因的胚胎干细胞注入猪的囊胚，而后将囊胚通过                          技术移入受体子宫，获得转基因猪。

⑷采用核移植技术克隆转基因猪时，应选用处于                期的卵母细胞作为受体细胞；随后从构建的重组胚胎中分离得到胚胎干细胞，经诱导分化形成多种器官，这是利用了胚胎干细胞的                                。