塑料袋造成的“白色污染”早已成为地球公害，塑料袋的自然分解需要20-1000年不等．2008年7月3日加拿大媒体报道：16岁的高中生丹尼尔-伯德从土壤中找到了一类假单胞杆菌，能将聚乙烯塑料的自然降解过程缩短至3个月，而且分解产物只有水和二氧化碳．伯德也因此被誉为“塑料袋的克星”．以下是伯德寻找到聚乙烯降解菌的大致过程．请回答：

（3）对培养基灭菌的常用方法是________________。接种前需要检测使用的培养基是否被污染，方法是__________________________。

（4）I号培养基属于______培养基，其作用是使目的菌能“脱颖而出”．如图采用的接种方法为______．

（5）使用Ⅱ号培养基的目的是使目的菌数目增多，若对目的菌进一步培养，则其增长呈____型曲线增长。Ⅱ号培养基中必须包含水、无机盐、______等基本营养成分．从物理性质来看，Ⅱ号培养基中________（填“不能”或“能”）添加琼脂．假设该同学发现培养基上细菌数目过多连成一片，说出一种可能的原因并提出合理的处理措施。原因：__________________________；

在生产研究上，常常需要进行微生物的培养和计数。回答下列与微生物的培养与利用有关的问题：

（1）下图是利用______________法将微生物接种到固体培养基上，把混合的菌种逐步稀释分散获得单个菌落。接种后培养基应______________放在37℃恒温培养箱中进行培养。

（2）分析下面培养基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O、琼脂。若此培养基用于筛选尿素分解菌，则应除去上述培养基成分中的________，并加入______________和_____________。培养基中加入酚红作指示剂的原因是尿素分解菌能合成________将尿素分解为氨，使培养基pH发生改变，使菌落周围呈现红色。

（3）三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量。在对应稀释倍数为10⁶的培养基中，取0．2ml稀释液涂布，得到以下统计结果：

甲同学涂布了1个平板，统计的菌落数是260；

乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和246，取平均值232；

丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；

在三位同学的统计中只有一位同学的统计结果是相对准确可信的，按照该同学的结果，每毫升原液中的菌体数是______________。

（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行_____________处理后，才能倒掉。

（5）用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量______，因为_______________． 

如表是某微生物固体培养基的配方。请回答下列问题：

    （1）根据培养基的成分分析，所培养微生物的同化作用类型是____________，表中的“？”应该是________________________。

    （2）如图所示在用稀释涂布平板法进行接种时，不能得到的是图____________。统计饮用水中大肠杆菌数目时，____________（填“需要”或“不需要”）设置对照，原因是___________________。

    （3）若要分离分解尿素的细菌需将培养基中的____________换成____________；若要鉴定分解尿素的细菌还需在培养基中添加____________指示剂。

下图表示微生物培养与利用的相关实验技术，请回答下列问题：

（1）在培养基的制备过程中，A表示      ，B表示灭菌，常用的方法是      。

（2）D是微生物接种最常用的方法之一，它包括         和         两步操作。

（3）在筛选土壤中分解尿素的细菌时，所用培养基以尿素作为       ；在统计菌落数目时，一般选择菌落数在       的平板进行计数。若要对分离的菌种作进一步的鉴定，可在选择培养基中加入       指示剂，若指示剂变       ，则可初步鉴定该种细菌能够合成       ，分解尿素。

(1)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的____________。实验需要振荡培养，振荡培养的作用是__________________________________，由此推测目的菌的代谢类型是____________。

(2)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量增多。

(3)转为固体培养基时，常采用平板划线法或_____________ 进行接种。平板划线法所使用的工具称_______，这种工具操作时应采用的灭菌方法是_________。接种时，在第二次及其后的划线操作时，总是从__________________开始划线。

(4)某同学将污水样液制成了10¹〜10⁴的四个稀释样液，分别取0.1mL接种到4组(每组4个)固体选择培养基上，若在10³组的4个平板上，获得的菌落数是357、39、38和37，则每升污水样液中的活菌数约为____________个。

(5)在上述实验操作过程中，获得纯净目的菌的关键是_________________。

(1)酿酒所需的微生物是        ，产生的酒精可以与            (试剂)发生显色反应。

(2)在变酸的酒的表面观察到的菌膜是           在液面大量繁殖而形成的。若要对该菌进行初步分离纯化，比较便捷的操作是：采用            法(填“平板划线”或“稀释涂布平板”)把它们接种到          (填“固体”或“液体”)培养基上，经培养得到肉眼可见的           。

(3)实验室中常用                法对培养基及器皿进行灭菌。不同培养基的具体配方不同，但一般都含有水、            、           和无机盐。

回答下题：

（一）酵母膏胨葡萄糖（YPD）培养基是一种常用的酵母菌培养基，其基本配方是：1%酵母膏，2%蛋白胨，2%葡萄糖。某兴趣小组欲用超市购买的干酵母进行系列生物技术实践尝试，请回答下列问题：

（1）干酵母处于休眠状态，为迅速活化酵母菌，应将干酵母放在小烧杯中，加入少量温水和极少量  ______  ，混匀。

（2）为防止YPD培养基中的葡萄糖分解碳化，要选用以下选项中的 ______ 灭菌条件。

A．121℃、lkg/cm²压力、15min         B．121℃、500g/cm²压力、15min

C．90℃、500g/cm²压力、30min         D．90℃、500g/cm²压力、15min

有些培养基成分中含不能加热灭菌的化合物，如尿素等，应该用  ______  除菌。

（3）若要对酵母菌进行划线分离培养，则应在培养基中添加  ______  ，并用  ______  蘸取菌液，进行划线。

（二）下图为转基因奶牛的克隆过程，据图回答问题。

（4）动物细胞培养基的营养成分中，应该添加  ______ 等一些天然成分。不管是原代培养还是传代培养过程中一般都需要用  ______酶处理使细胞分散。

（5）③操作过程称为  ______  技术，图中早期胚胎的外表一层扁平细胞B称为  ______  。

（6）在④操作前应对受体母牛进行 _______  处理。

（1）如用大肠杆菌作为受体细胞，则该大肠杆菌中不应含有青霉素抗性基因，请阐述其原因？                                   。

（2）培养导入了重组质粒的大肠杆菌时，需配制培养基。该培养基除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入的物质有（    ）（多选）

A．细胞分裂素 B．琼脂 C．噬菌体 D．青霉素 

（3）培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是         ；一般对配制的培养液采用

         法灭菌。

（4）微生物接种培养时，可采用两种方法。下图为接种后微生物培养的效果图，那么，获得图A效果的接种方法是______________，获得图B效果的接种方法是_____________。

（5）与大肠杆菌相比，嗜热菌具有的特点是         。（多选）

（1）土壤中富含各种微生物，将其浸出液接种到特定的         培养基上，可得到目的菌。不同培养基的具体配方不同，但一般都含有                       等营养物质。

（2）要统计土壤样品中某活菌的数目，宜采用            法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的             就能大约推测出样品中的活菌数。

（3）自古酒就与人类生活息息相关。在下图所示两发酵瓶中装入等量的葡萄汁进行葡萄酒制作实验，若在A装置的通气口补充无菌空气，那么一段时间后，能获得葡萄酒的是______装置。工业生产中，当酿制好葡萄酒后还可利用其进一步酿制葡萄醋，该过程中需改变的发酵条件主要是                            。