（I）大肠杆菌是与我们日常生活联系非常密切的细菌，请回答有关检测饮用水中大肠杆菌的问题：

（1）检测饮用水中大肠杆菌的含量时，通常将样品进行一系列的梯度稀释，将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，然后记录菌落数量，这种方法称为_____________。判断下面所示的4个菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是__________________。

（2）用上述方法统计样本中菌落数时是否需要设置对照组？__________（填“需要”或“不需要”），其原因是需要判断培养基___________，对于固体培养基应采用的检测方法是将________________的培养基在适宜的温度下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。

（3）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行________（填“消毒”或“灭菌”）处理；操作者的双手需要进行清洗和________________；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使其内蛋白质变性，还能损伤它的____________的结构。

（4）检测大肠杆菌实验结束后，使用过的培养基及其培养物必须经过________________处理才能丢弃，以防止培养物的扩散。

35.（II）   根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。

AATTC……G

G……CTTAA

为使载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是________。

（3）反转录作用的模板是____________，产物是__________。若要在体外获得大量反转录产物，常采用________技术。

（4）基因工程中除质粒外，________和______也可作为载体。

（5）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是_________________________。

李斯特菌广泛存在于各类食品中，李斯特菌在李斯特菌显色培养基上培育时菌落会呈现蓝绿色。在目前发现的16种李斯特菌中单增李斯特菌是唯一对人有致病性的一种，与其他李斯特菌相比，单增李斯特菌还能合成并分泌磷脂水解酶，使培养基中的磷脂被分解而在单增李斯特菌菌落周围出现白色晕环。

（1）与单增李斯特菌相比，其他李斯特菌不能合成并分泌磷脂水解酶的根本原因是_____________________。

（2）现要检测某食品中是否含有其他李斯特菌和单增李斯特菌，进行了相关实验：

①将该食品样品加入经___________灭菌的李斯特菌选择培养液中培养，培养的目的是_________________。

②将经过培养的菌液接种到鉴定李斯特菌的培养基上，常用的接种方法有___________________。鉴定李斯特菌的培养与李斯特菌选择培养液相比，还需额外添加显色剂、__________和__________。

③将接种后的培养基置于适宜条件下进行培养。一段时间后若培养基上出现___________的菌落，则说明该食品中含有单增李斯特菌。

中国家电研究院的洗衣机专家指出，洗衣机内部的环境非常潮湿，洗衣机使用时间越长，内部滋生微生物的机会就越大。看似干净的洗衣机，其内部隐藏着一个健康的隐形杀手。某生物兴趣小组的同学，利用内桶背面的污垢进行了相关实验室实验。

（1）培养洗衣机内部微生物的培养基中一般含有_____________

（2）鉴定洗衣机污垢中是否有菌落时要制备固体培养基，在制备完毕后要进行倒平板操作，将平板倒置。这样做的目的是_______________________

（3）用稀释涂布平板法统计样本菌落数时是否需要对照组？目的是？_________________________________

（4）判断污垢中微生物的种类可以依据菌落的形状、大小等菌落特征进行初步的____________。实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，此目的是_________________。

土壤中含有大量的难溶性磷酸盐，为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸收的可溶性磷的优良解磷菌株，以便将其添加到有机肥中，改善植物磷元素供应。科研人员进行如下实验：

实验原理：固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈(如右图)，透明圈直径(D)与菌落直径(d)的比值( D/d)代表微生物溶解磷的能力大小。

实验步骤：

步骤1　取某地区土样5 g制得土壤溶液后稀释，取稀释液1 mL接种到基础培养基A上，在适宜温度下培养72 h。

步骤2　在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种，培养3～4 d后观察菌落特征和透明圈的大小，初步筛选出三种优良解磷菌株(如下表)。

分析回答：

(1)从物理形态看，培养基A属于________培养基。培养基中磷源应该是________。

(2)步骤1中接种方法是________，步骤2中接种环的灭菌方法是________。

(3)根据实验结果可以确定溶解磷能力最强的菌株是________。

(4)为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基B中，并在37℃、200 r·min^－1摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到如图所示曲线。  

①用摇床进行培养的好处是__________________。

②结果表明最优良的解磷菌株是________。

(一)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题。

(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于________培养基。

(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________和________。

(3)筛选高效菌株时，可比较单菌落周围________________，____________说明该菌株的降解能力________。

(4)细菌种群进化过程中，其主要作用的变异来源是_________________。

(二)富集培养是微生物学中的最强有力的技术手段之一。主要是利用不同微生物生命活动特点的不同，制定环境条件，使仅适应该条件的微生物旺盛生长，从而使其数量大大增加。下图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物——对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。请分析回答下列问题。

(1)①→③重复培养的目的是_____________________________。

(2)⑤的菌落中大部分是降解________微生物。设置⑥的目______________。

(3)⑤→⑥采用单细胞挑取法，将所选菌种接种到⑥的培养基中，在此操作过程中如何防止杂菌污染(至少写出两点)。_____________________________________________________。

→→→→

(1)在生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生物的培养基，称做________。

(2)配制培养基时，要加入尿素和________指示剂，这是因为Hp含有________，它能以尿素作为________源；若有Hp，则菌落周围会出现________色环带。

(3)步骤X表示________。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液________到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得________菌落。

(4)临床上用¹⁴C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将¹⁴C标记的________分解为NH₃和¹⁴CO₂。

在日常生活中，一提到细菌、真菌及病毒这些微生物，人们往往首先想到它们的害处，其实，很多微生物对人类是有益的，它们与我们人类的关系非常密切，而且人类巳经应用微生物造福于我们的生活。请回答下列问题。

（1）从自然界获得纯种酿酒酵母菌的基本程序：配制培养基→接种→培养→观察记录→纯化培养。

①采用平板划线法接种，开始接种时要灼烧接种环，目的是________________________。

②若葡萄汁中含有醋酸菌，在葡萄酒发酵旺盛时，醋酸菌能否将酒精转变成醋酸？____________________，原因是____________________。

（2）在腐乳的制作过程中，有多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是_____________。产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的_____________，_________可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。

（3）利用纤维素解决能源问题的关键是高性能纤维素酶的获取。科学家利用培养基从土壤中选择出能分解纤维素的细菌，经过大量培养后可以从中提取纤维素酶。土壤中富含各种微生物，将土壤浸出液接种到           培养基上，可得到能分解纤维素的细菌，实验室中获取纯净菌的常用方法有___________和__________。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、________________。

(1)在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是________，有透明带菌落利用的氮源主要是________，据此可筛选出目的菌。

(2)若要统计某土壤样品中该活菌数目，宜采用__________________法。一同学在稀释倍数为10⁵的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中的菌落数是__________个(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)。用这种方法测定的大肠杆菌菌落数比实际活菌数量_________，因为_                 _。

(3)要鉴定分离得到的微生物，常需要借助生物化学的方法．如在以尿素为唯一碳源的培养基中加入______ ，可用来鉴定分解尿素的细菌；在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入______ ，可用来鉴定纤维素分解菌．如果观察到产生______ 的菌落，说明可能获得了纤维素分解菌．为了确定是纤维素分解菌，还需要进行_____ 的实验．

急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌、病毒通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施,请回答下列与检验饮用水有关的问题:

(1)检验大肠杆菌的含量时,通常将水样进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,记录菌落数量,这种方法称为 。下面四种菌落分布图中,不可能是由该方法得到的是            。

(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组? 。为什么? 。

(3)如果各取0.1 mL已稀释10³倍的水样分别涂布到3个琼脂固体培养基的表面进行培养,培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57,则每升原水样中大肠杆菌数为 。

(4)已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气,现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管,应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌?  。

根据从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤，回答有关问题：

(1)不同微生物的生存环境不同,获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样,然后再按一定的方法分离、纯化.培养噬盐菌的菌样应从       环境采集。

(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件,使其群落中的数量大大增加,从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温纤维素酶微生物的富集培养应选择____________的培养基，并在_____________条件下培养。

(3)接种前要对培养基进行______________________处理。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在__________________条件下进行。

(4)下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图。获得图A效果的接种方法是__________，图B效果的接种方法是___________。一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是____________________________。

(5)如果探究温度对纤维素酶活性的影响，自变量是____________，应该保持___________________等不变(至少答两项)。