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            • 1.

              为获取可降解高盐度工业废水中有机物的耐盐菌,研究人员进行了如下实验:

              ①制备含3%NaCl的固体培养基,以及含3%、5%和7%Nacl以高盐度工业废水中有机物为碳源的液体培养基;

              ②将高盐度废水采用平板划线法接种到含3%NaCl的固体培养基,如图一。然后置于适宜条件下培养一段时间,观察形成的菌落特征;

              ③将分离纯化后的菌株接种到固体斜面培养基上,适宜条件下培养适当时间,将试管置于4℃冰箱中保藏待用;
              ④取固体斜面上的菌株制成菌液,取等量菌液,分别加入到步骤①中制备的3组液体培养基中摇床培养35小时,定时取样统计活菌数目。测定结果如图二所示。

              回答下列问题:
              (1)配制培养基时,灭菌、添加NaCl溶液和调节pH的先后顺序是________________________。
              (2)步骤②平板划线操作过程中,第一次划线前灼烧接种环的目的是防止杂菌污染,第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是________________。完成图一所示操作,至少需要灼烧接种环__________次。
              (3)步骤④中常采用_____________法统计活菌数目。直接从静置的培养液中取样计数的做法是错误的,正确的操作是_____________________________________。若每种浓度设3个重复实验,每次统计活菌数目时,需要从_____________个培养瓶中取样。

              (4)由图二可知,该耐盐菌最适合处理含________(浓度)NaCl的废水。用该耐盐菌处理较高盐度工业废水时,需要_________________(合理措施),才能达到理想效果。

            • 2.

              某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明,乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。

              (1)为了缩短泡菜制作时间,可在冷却的盐水中加入少量陈泡菜液,目的是___________________。

              (2)泡菜液中的乳酸的产生场所是乳酸菌的___________。在制作泡菜初期,泡菜坛水槽总是有气泡冒出的主要原因是_______________。随着泡制时间的延长,泡菜坛中亚硝酸盐的含量变化趋势为__________

              (3)为分离纯化出优质的乳酸菌,应挑选_________________的菌落作为候选菌。

              (4)乳酸菌发酵产酸奶,发酵到后期时,发酵速度逐渐变缓甚至停止,主要原因是:___________________。

            • 3.

              在白酒发酵的窖池中,培养液的pH≤4.5后,酵母菌的代谢活动逐渐受到抑制,甚至停止发酵。耐酸性酵母菌能在pH≤3.5的环境下继续表现出较强发酵能力,适宜作白酒发酵生产用菌种。为选育适合白酒生产的耐酸性强的酵母菌,研究者进行实验。

              (1)酵母菌的呼吸作用类型是________。在发酵过程中,窖池中培养液的pH会逐渐下降,原因是___________________________。

              (2)取适量窖底泥、酒糟和黄浆水,分别溶于10 mL________中,再各取1 mL上清液接入10 mL麦芽汁培养基中培养,2天后分别接种到不同酸碱度的麦芽汁培养基上,培养结果见下表。

              菌种来源

              pH

              窖底泥

              酒糟

              黄浆水

              5.0

              + + + + +

              + + + +

              + + + +

              4.0

              + + + +

              + + +

              + + + +

              3.0

              + + +

              + +

              + + +

              2.5

              + +

              +

              +

              2.0

              +

              -

              -

              注:“+”越多表示菌体长得越好,“—”表示几乎不生长。

              (3)在pH≤3.5的环境下,仍可检测到少量耐酸性酵母菌生长,这些菌株是________形成的。

              (4)从pH为________的培养基中获得菌种,可通过________法接种到培养基上,进行纯化培养。

              (5)实验获得了三个耐酸性强的酵母菌菌株,特点如下表。

              菌株

              A

              B

              C

              特点

              pH≤3.5时,生长代谢正常、优于其它常规菌种

              pH≤3.5时,生长代谢正常,pH4~6时不正常

              pH2.5~6,生长代谢正常、优于其它常规菌种

              依据菌株特点,研究者认为C菌株更适合作为白酒发酵菌株,作出这一判断的理由是_____________________________。

            • 4.

              分离筛选降解纤维素能力强的微生物,对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题具有重要意义。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、KCl、酵母膏以及水解酪素配制的培养基,成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物。请回答下列问题:

              (1)培养基中加入的化合物A是________。本实验将样品稀释涂布到鉴别培养基之前要进行选择培养,目的是______________________。

              (2)为了筛选出能产生纤维素酶的微生物,向培养基中加入________溶液,等培养基上长出菌落后,能产生纤维素酶的菌落周围会出现________。

              (3)为在培养基表面形成单个菌落,若以接种环为工具,则用________法进行接种。若用稀释涂布平板法进行接种,在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是________________________________________________________________________。

              (4)用三种菌株对秸秆进行处理,并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定(结果如图)。

              据图分析可知,三种菌株对________的降解作用最强。与第5天结果相比,第10天秸秆各组分中________的降解率变化最大。

            • 5. 水污染是全球性的环境问题,微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇(PVA)是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物,PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA,PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物,当PVA被分解时蓝绿色复合物消失,形成白色透明斑,请回答下列问题:

              (1)要从土壤中筛选出能高效分解PVA的细菌,应采用以______________作为唯一碳源的选择培养基,实验中还应设置对照组。将菌液稀释相同的倍数,对照组培养基上生长的菌落数目应明显______________ (填“多于”或“少于”)选择培养基上的数目,从而说明选择培养基具有筛选作用。

              (2)要测定土壤稀释液中微生物的数目.可在显微镜下用______________计数板直接计数。若将100 mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释104倍后,取0.1mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面,测得菌落数的平均值为160个,空白对照组平板上未出现菌落,则100 mL原菌液中有PVA分解菌_________个,该方法的测量值与实际值相比一般会___________(填“偏大”“偏小”或“相等”)。

              (3)要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌,培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入______________,用于鉴别PVA分解菌。要比较不同菌株降解PVA能力的大小,用含相同PVA浓度的上述培养基来培养不同菌株.一定时间后,通过测定______________来确定不同菌株降解PVA能力的大小。

            • 6.

              苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中,对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤,从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题:

              (1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水,其中可作为碳源的有________________。

              (2)将采集到的样品接种培养,苯酚用量应随转接次数增加而逐渐____________,

              以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集,应进一步_____________,以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外,还必须添加_____________。

              (3)下图为连续划线法示意图,在图中__________(填图中序号)区域更易获得单菌落。

              (4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应,下表中1~5号比色管的苯酚浓度应分别为________________。

              如果废水为50mg/L苯酚溶液,降解后约有21%的苯酚残留,则需将残留液稀释_____________(填序号:①5②10③20)倍后,再进行比色。

            • 7.

              请回答下列与微生物有关的问题。

              (1)土壤中具有分解尿素的细菌能产生脲酶,该酶能将尿素分解           

              (2)为从富含尿素的土壤中分离获得尿素分解茵的单菌落,某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表):


              (注:“+”表示有,“-”表示无)

              培养基甲________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别尿素分解菌,原因是                              ;培养乙基________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别尿素分解菌,原因是             

              (3)如分别取0.1mL已稀释102倍的水样分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养,培养基记录到产生脲酶的细菌的菌落数分别为152、154、156、370,则每L原水样中该细菌数为____        ____个。

              (4)纯化细菌时________(填“可”或“不可”)用加入抗生素的方法防止杂菌感染。

              (5)尿素分解菌在-20℃长期保存时,菌液中常需要加入一定量的________。

            • 8.

              土壤酶是由土壤微生物产生的,具有催化作用的一类蛋白质,如脲酶、蔗糖酶等。土壤酶易受到环境中外源物质(如除草剂、重金属、肥料等)的影响。科学家研究了氟磺胺草醚和甲咪唑烟酸两种除草剂对土壤中脲酶和蔗糖酶活性的影响。

              (1)研究者从近年________(填“喷洒”或“未喷洒”)过除草剂的环境中选取表层土壤作为实验样品。

              (2)各实验组称取200g的土壤置于棕色广口瓶中,分别添加等量的不同质量浓度的除草剂溶液,同时设置空白对照组。广口瓶用________(填“脱脂棉”或“保鲜膜”)封口,置于________中培养。分别在培养不同天数后取样,测定土壤中脲酶和蔗糖酶的活性。结果如下表所示。



              (3)本实验的自变量是处理时间和________。实验结果显示,两组除草剂中的________的各实验组对土壤脲酶活性的影响随时间变化,均呈现“抑制-激活-抑制”的趋势。对土壤蔗糖酶活性激活率最高的处理条件是________。

              (4)欲从上述土壤中筛选出蔗糖分解菌或尿素分解菌,则应将土壤浸出液采用________法接种到经________灭菌法处理的相应的固体平板培养基上。

            • 9.

              酸奶是以牛奶为原料,经过巴氏杀菌后再向牛奶中添加有益菌,经发酵制成。家庭自制酸奶的安全隐患是有害菌污染问题,为检测自制酸奶是否被杂菌污染,进行如图所示操作。回答下列问题。


              (1)制备牛肉膏蛋白胨培养基,当温度大约为       时适合倒平板。

              (2)取最终的牛奶稀释液0.1 mL滴在培养基上进行涂布,涂布前要将涂布器         才能涂布。如果培养基上出现不同的菌落,说明自制酸奶已被杂菌污染。区分不同菌落种类的依据是          

              (3)在恒温培养箱中培养一段时间后,3个平板上菌落数分别为65个、63个、64个,则可以推测酸奶中每毫升含菌数为        个。运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小,原因是        

              (4)已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌,进一步分离纯化乳酸菌用平板划线法,该操作中常使用的接种工具是         。若培养后获得的某个平板,第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落,则造成第一条线上无菌落的可能操作失误有                

            • 10. 某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3,供植物吸收和利用.回答下列问题:
              (1)为了筛选可分解尿素的细菌,在配制培养基时,应选择____________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”)作为氮源,不选择其他两组的原因是_____________________________。
              (2)有些细菌能分解尿素,有些细菌则不能,原因是前者能产生__________,能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源,原因是_______________________________。但可用葡萄糖作为碳源,进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是___________(答出两点即可)。
              (3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4,其作用有_______________(答出两点即可)。
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