石油是人类重要的化工原料之一，其在给人类生产生活带来便利的同时也对陆地和海洋造成污染，下图是科研工作者分离能分解石油污染物的假单孢杆菌的过程。请根据流程图回答下列问题：

土壤取样→A→梯度稀释→涂布到培养基上→筛选目的菌株（假单孢杆菌）

（1）A过程为___________，目的是增加假单孢杆菌的浓度，该培养基中应当以___________为唯一碳源。该实验过程中需要设置完全培养液对照组，将菌液稀释相同的倍数，对照组培养基上生长的菌落数目应明显___________（填“多于”或“少于”）选择培养基上的菌落数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。

（2）实验中需要用___________对菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同浓度的菌液分别滴加到固体培养基的表面，用___________（器具）涂布均匀并进行培养，以便获得单个菌落。

（3）若实验中用10³倍的0.1mL的稀释液分别涂布三个平板，培养后分别形成了98、100和102个菌落，则每毫升原样液中含有假单胞杆菌___________个，实际值一般要比该测量值偏大的原因是___________。

回答下列（一）、（二）小题。

(一）某研究小组欲用苹果汁为原料，利用发酵瓶制作果酒和果醋，请分析回答：

(1)将苹果汁放入发酵瓶，要预留约________的空间。为得到酒精和糖含量较高的果酒，可在果汁中加入一定比例的______。若发酵瓶内持续无气泡产生，则需加入更多的_______，使发酵作用尽快发生。

(2)变酸的果酒表面有一层醋杆菌形成的菌膜，若要在该菌膜中筛选高表达量的醋杆菌菌株，可通过获得_______的方法来分离筛选。若要统计获得菌种的数目，则常采用_________法。对获得的优质醋杆菌菌种常用划线法接种在固体培养基______上低温保存。

(3)下图是果酒和果醋的发酵装置，关于果醋发酵叙述错误的是_______

A.发酵前，瓶内酒—冰混合物的pH需调至7.0

B.发酵过程中，充气口要适时适量充气

C.发酵过程中，排气口排出醋酸发酵产生的CO₂

D.发酵完成后，出料口的pH值不再减少

 (二）请回答杂交瘤技术和单克隆抗体制备的有关问题。

(1)杂交瘤技术制备单克隆抗体时，利用一定的物质，如生物诱  导剂_____作介导，使经免疫的小鼠脾细胞与________细胞融合，筛选出融合的细胞再进行细胞的______培养，获得纯系细胞，同时还要进行________检验，以保证获得的是所需的特定杂交瘤细胞。

(2)有关杂交瘤细胞体外培养的叙述，正确的是________

A.用固体培养基培养          B.用滋养层细胞支持生长

C.能进行传代培养            D.需要对细胞进行研磨破碎获得产物

(3)现在欲利用基因工程技术生产单克隆抗体，科研小组将与抗体形成有关的关键基因通过噬菌体导人到受体细胞，该技术的核心步骤是______________,噬菌体是这些关键基因的___________。

为了获得β-胡萝卜素产品，某小组开展了产β-胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：

(1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是___________________________；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该_________________________。

(2)为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，基目的是__________________。

①安全阀、放气阀、压力表　　②放气阀、安全阀、压力表

(4)为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是_______。

酸菜，古称菹，《周礼》中就有其大名。制作酸菜的初衷是为了延长蔬菜保存期限。请回答：

（1）酸菜制作起主要作用的微生物是_____________。但是在发酵初期，很多杂菌会大量繁殖，其中导致泡菜水的表面长白膜的微生物是_______

______________。 

（2）实验室可采用___________________________法进行菌种纯化，所用培养基一般用___________法进行灭菌。 

（3）为了保持所获得菌种纯净，需要进行菌种的保藏。对获取的菌种通常是在_________条件下短时间保藏，也可以利用____________的方法长期保存。

（4）市场上购买的真空包装酸菜，在没有发生漏气状态下发生了“胀袋”现象，A同学怀疑是杂菌污染导致的，B同学怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，说出你支持谁的观点并说出理由。支持___________，理由是____________________。 

某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答下列问题。

(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选_  _______，这种培养基属于________培养基。

(2)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的____  ____，实验需要振荡培养，由此推测目的菌的代谢类型是异养________型。(填“需氧”或“厌氧”)

(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量________。(两空均填“增加”或“减少”)

(4)在上述实验操作过程中，获得纯净目的菌的关键是防止____            ___。

(5)转为固体培养基时，常采用           和             进行接种，所用的接种工具分别是________________和               。

(6)实验结束后，使用过的培养基应该进行__________处理才能倒掉，以防止微生物的扩散。

请回答下列与微生物培养相关的问题：

（1）土壤中具有分解尿素的细菌，此类细菌能产生________酶，该酶能将尿素分解成____________。

（2）某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下。将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1000ml，再经高温灭菌，制成固体培养基备用。

根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中能分解尿素的细菌？__________（填“能”或“不能”），原因是__________________。

（3）某小组采用平板划线法分离某样品的细菌时，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是_______________________________。使用稀释涂布平板法检测土样中细菌含量时，在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养一段时间，这样做的目的是_________________。

（4）在分离尿素分解菌的实验中，大部分同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而有一个同学从培养基上筛选出大约150个菌落，这种实验结果差异产生的原因可能是________________、_______________。

某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。

(1)为了缩短泡菜制作时间，可在冷却的盐水中加入少量陈泡菜液，目的是___________________。

(2)泡菜液中的乳酸的产生场所是乳酸菌的___________。在制作泡菜初期，泡菜坛水槽总是有气泡冒出的主要原因是_______________。随着泡制时间的延长，泡菜坛中亚硝酸盐的含量变化趋势为__________

(3)为分离纯化出优质的乳酸菌，应挑选_________________的菌落作为候选菌。

(4)乳酸菌发酵产酸奶，发酵到后期时，发酵速度逐渐变缓甚至停止，主要原因是：___________________。

为了调査成都自来水的水成情况，某研究小组对自来水水样中的细菌含量进行了测定，请回答下列问题：

（1）在微生物的培养过程中，实验室对培养基灭菌常用的方法是       。为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养基      培养。

（2）若小组采用平板划线法分离水样中的细菌，划线时落在培养基上共画了5个区域，则共需要    次灼烧接种环。

（3）检测自来水中大肠杆菌的数量,可选用伊红美蓝培养基，伊红美藍培养基除了为大肠杆菌的生长繁殖提供水和碳源外，还可以提供      等基本营养成分。该培养基从功能方面属于       培养基。

（4）为了保证居民生活饮用水的安全，经常需要测定饮用水中大肠杆菌的数目。具体操作是将已知体积的饮用水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌的菌落呈现      ，根据菌落的数目，计算出饮用水中大肠杆菌的数量，这种测定细菌的方法称为            。

（5）该研究小组在统计菌落数目时，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，如果接种后一个平板经培养后的菌落分布如图所示，推测接种时可能的操作失误是        。

请回答下列与微生物有关的问题。

（1）土壤中具有分解尿素的细菌能产生脲酶，该酶能将尿素分解           。

（2）为从富含尿素的土壤中分离获得尿素分解茵的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：

（注：“＋”表示有，“－”表示无）

培养基甲________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是                              ；培养乙基________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是             。

（3）如分别取0.1mL已稀释10²倍的水样分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到产生脲酶的细菌的菌落数分别为152、154、156、370，则每L原水样中该细菌数为____        ____个。

（4）纯化细菌时________（填“可”或“不可”）用加入抗生素的方法防止杂菌感染。

（5）尿素分解菌在－20℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的________。

土壤酶是由土壤微生物产生的，具有催化作用的一类蛋白质，如脲酶、蔗糖酶等。土壤酶易受到环境中外源物质（如除草剂、重金属、肥料等）的影响。科学家研究了氟磺胺草醚和甲咪唑烟酸两种除草剂对土壤中脲酶和蔗糖酶活性的影响。

（1）研究者从近年________（填“喷洒”或“未喷洒”）过除草剂的环境中选取表层土壤作为实验样品。

（2）各实验组称取200g的土壤置于棕色广口瓶中，分别添加等量的不同质量浓度的除草剂溶液，同时设置空白对照组。广口瓶用________（填“脱脂棉”或“保鲜膜”）封口，置于________中培养。分别在培养不同天数后取样，测定土壤中脲酶和蔗糖酶的活性。结果如下表所示。

（3）本实验的自变量是处理时间和________。实验结果显示，两组除草剂中的________的各实验组对土壤脲酶活性的影响随时间变化，均呈现“抑制-激活-抑制”的趋势。对土壤蔗糖酶活性激活率最高的处理条件是________。

（4）欲从上述土壤中筛选出蔗糖分解菌或尿素分解菌，则应将土壤浸出液采用________法接种到经________灭菌法处理的相应的固体平板培养基上。