有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染．某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株．回答问题：

实验室通常需要对目的菌种进行纯化。回答以下关于微生物实验室培养的有关问题。

（1）获得纯净培养物的关键________________________。在无菌技术中，对操作者用酒精擦拭双手属于________，对金属用具、玻璃器皿、培养基等要进行灭菌，其中，培养基只能用__________灭菌。

(2)通常在某一环境中微生物有多种并混合在一起，若要对某种微生物进行纯化，最常用的方法是平板划线法和__________________。使用平板划线法时，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是______________________。

（3）制备培养基的操作步骤是_____________________。（用下列字母排序）

a．倒平板 b．计算     c．溶化      d．称量     e．灭菌

艾弗里等人的肺炎双球菌体外转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，回答下列问题：

（1）科研人员在实验室验证了艾弗里的实验，为了更直观的观察到培养基内有无转化发生，用于体外培养肺炎双球菌的培养基应选择___________（“固体”或“液体”），如果选用牛肉膏蛋白胨培养基培养，牛肉膏的作用是___________，接种方法为____________。

（2）为确保操作环境（接种室、接种箱、超净工作台等）无污染，应采用___________消毒，为加强消毒效果还应喷洒适量的______________等化学抑菌剂。

（3）接种后经过恒温培养24小时后，可通过________________________现象确定发生了肺炎双球菌的“转化”。

研究人员为获得用于烟气脱硫的脱硫细菌,进行了如下操作。请回答下列问题:

(1)取样与选择培养:在某热电厂烟囱周围区域采集土样,取样用的小铁铲和盛装土样的信封在使用前都需要________。选择培养的目的是增加________的浓度。 

(2)驯化脱硫细菌:将目的菌转移到含少量无菌水的锥形瓶中,边搅拌边持续通入SO₂气体,驯化几分钟后接种到固体培养基上,待长出菌落后再重复上述步骤,并逐步延长通SO₂的时间,与此同时逐步降低培养基的pH。由此分离得到的脱硫细菌具有____________________和____________________的能力。 

(3)培养、观察与应用:为获得大量的目的菌以用于生产,在培养过程中技术人员需连续取样进行计数,计数方法一般有稀释涂布平板法和____________法。当用前者进行计数时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的____________,统计平板上的菌落数即可推测出样品中含有的活菌数目。通常情况下,用此计数方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目__________。

(4)土壤中分解尿素的微生物的分离与计数中，接种时每个稀释度下至少接种______组用于统计菌落数，一般选择菌落数为________的平板用于计数。

(5)对分离分解尿素菌进一步鉴定需要在培养基中加入_________。

淀粉分解菌是能分解淀粉的一类微生物，在自然条件下，淀粉分解菌和其他各种细菌混杂生活在土壤中。某实验小组利用培养基将土壤中的淀粉分解菌筛选出来，回答下列问题：

（1）将土壤中的淀粉分解菌筛选出来的培养基应添加_____________作为唯一的碳源，此外还需要添加的成分有________________。微生物的接种的方法很多，最常用的是________________和________________。

（2）该实验小组将样液分别稀释了 10^１倍、 10² 倍、 10³ 倍、 10⁴ 倍，然后将 10² 倍、 10³ 倍、 10⁴ 倍的稀释液分别涂布在不同的平板上，若有三个平板均涂布了稀释倍数为 10³ 倍的稀释液 0.1 mL，分别形成了 68、 70 和 72个菌落，则原样液体中每升含有淀粉分解菌_____________个，该方法测量值一般比实际值___________，原因是________________________________  。

（3）胡萝卜素化学性质比较稳定，易溶于有机溶剂，可采用萃取法提取。萃取过程中采用___________加热，因为______________________________________________________；

萃取装置要在加热瓶口安装回流冷凝装置，其目的是___________________________________ 。

传统发酵技术和微生物分离、纯化过程中，无菌操作是微生物接种技术的关键。某实验小组欲从污水污染的污泥中筛选出脲酶细菌(脲酶可将尿素分解为氨）。回答下列问题：

（1）配制培养基时各种成分在溶化后分装前一般需要先_______；平板冷却凝固后一般要_______放置，这样操作的目的是____________________。

（2）在菌株筛选过程中，应将污泥样品稀释液接种于______________固体培养基上；并加入_________指示剂加以鉴别。平板划线法时在第二次及其后的划线操作时，总是从____________开始划线，原因是_______________________________ 

（3）如何设计实验判断培养基是否被污染？_________________________________________________________

（4）对于频繁使用的菌种，可以采用______的方法进行保藏，但该方法具有________________________缺点。

（1）像其他微生物一样，酵母需要适当的营养和合适的环境条件，培养时培养液中的营养物质主要有 ____________________等。(要求回答4种营养物质)

（5）为筛选和纯化酵母菌，根据用途应选用 __________________培养基，常用的接种方法 _______和 _________．扩大培养过程中需要对酵母菌进行计数，取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计了三个平板，菌落数分别是200、180、220．则样品中微生物的数量为 ______________个/mL．该统计结果 ____________（低于、高于）实际值。

东湖绿道二期已向市民开放，我市某中学学生模拟公司课外兴趣小组为了调查东湖的水质状况，在东湖白马驿站区域取样后测定了水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。请回答下列问题：

（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时问，这样做的目的是________________；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37，据此可得出每升水样中的活菌数为________________。如果该小组实验组平板上菌落平均数为39个／平板，而空白对照组的一个平板上出现了2个菌落，这种结果说明在此次调查中培养基出现了________________现象。如果将37（即39－2）个／平板作为本组菌落数的平均值，你觉得该做法________________（填“可行”或“不可行”）。

（2）若想确定平板上的菌落是否有大肠杆菌，一般在培养基中加入伊红美蓝，该培养基从功能上划分属于________________培养基。

（3）该小组经讨论决定采用平板划线法分离水样中的细菌，在第二次及以后的划线操作时，应从________________开始划线，这样做的目的是________________。

（4）如下图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。采用该计数方法结果往往较实际值偏________，（填“高”或“低”）原因是________________。

（5）该小组将得烈的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中________________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高________________的利用率。

某生物兴趣小组想对土壤中能分解尿素的细菌进行分离，并统计每克土壤样品中的活菌数目，确定了培养基配方(如下表)。将配方中各种物质溶解后，用蒸馏水定容到l 000 mL，再经高温灭菌，制成固体培养基以备用。

（1）为保持干燥，培养皿用             法灭菌；待培养基冷却到     ℃(填“20”“30”“40”或“50”)左右时，在酒精灯附近倒平板；待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止                     ，防止造成污染。

（2）根据培养基的成分判断，该同学不能分离出土壤中分解尿素的细菌，原因是                                    。

（3）该同学采用稀释涂布平板法检测样液中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是                         ；然后，将l mL样液稀释l00倍，在3个平板上用涂布法分别接入0．1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37，据此可得出每升样液中的活菌数为           。

（4）若该同学采用显微镜直接计数法测量细菌数量，左下图是一块血细胞计数板正面示意图，其上有      个计数室。右下图是计数室中一个中格的细菌分布示意图，该中格内细菌数量应计为     。