(1)欲从多种微生物中分离某种细菌并抑制其他微生物的生长．应使用________培养基．纯化菌种时可采用比较简单的________法进行接种，接种操作应在________进行．

(2)纯化的菌种常采用固体斜面培养基临时保藏，该方法保存的时间较________，而且菌种易________．常用的凝固剂是________．

(3)从培养基所含的成分来看，从土壤中分离出固氮菌的培养基特点是________，从土壤中分离出纤维素分解菌的培养基特点是________．

（二）人组织纤溶酶原擞活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

(1)卵母细胞可以从活体________中采集，还可从已处死的雌羊卵巢中获取．对供体母羊用________处理，可以获取更多的卵(母)细胞．采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力．

(2)欲用有限的早期胚胎获得多个转基用个体，可以利用________技术．由于代孕母羊对移入其子宫的外来胚胎________，才使早期胚胎能在代孕母羊体内存活．

(3)质粒上应有________，才能使htPA基因插入其中．在转htPA基因母羊的肌肉细胞中________(能、不能)检测到目的基因．若在其羊乳中检测到________，说明目的基因成功表达．

已知硅酸盐细菌在无氮培养基、钾细菌培养基及硅酸盐细菌培养基上均能生长。表1为无氮培养基的配方，表2是每种培养基上每个稀释度的菌落数及菌落直径。请回答下列问题：

(1)表1从物理性质上看属于________培养基，按用途划分，属于________培养基。

(2)硅酸盐细菌能在无氮培养基上生长，推测该细菌具有________功能。

(3)为统计硅酸盐细菌的数目，应采用________法进行接种，该方法的所有操作都应在________附近进行。表2中，稀释度为________时，统计的结果较为可靠。

(4)为检测培养基灭菌是否彻底，应进行的操作是________。由表2中的数据得出，用________培养基分离硅酸盐细菌的效果最好。

   [生物——选修3：现代生物科技专题]

如图所示为培育二倍体转基因抗虫棉的两种思路，其中EcoRⅠ、SmaⅠ、BamHⅠ为三种限制酶，EcoRⅠ和BamHⅠ切割DNA形成黏性末端，SmaⅠ形成平末端。(箭头指向为对应的酶切位点。)回答下列问题：

(1)与思路2相比，思路1的最大优点是________。

(2)分析图可知，不宜选择SmaⅠ获取目的基因，理由是________；选择________酶，可避免目的基因和质粒的自身环化。

(3)基因工程获得抗虫棉的核心步骤是________。

(4)图①过程得到的重组质粒，除了图中标出的特殊DNA片段外，还应有________；将重组质粒导入植物细胞采用最多的方法是________，如采用该方法，则图中所用的质粒应为________。

(5)检测目的基因是否翻译的方法是________。

(1)过程②常用的发酵菌是________，在苹果酒的基础上制作苹果醋时，需要________(填“升高”、“降低”)温度，同时还需要适当________．

(2)该发酵菌种可以从食醋中分离获得．若用平板划线法分离该发酵菌，接种结束后，对接种环还要进行一次________灭菌，是为了________．

(3)对该发酵菌进行扩大培养时，将其接种到液体培养基中并混匀，然后分为甲乙两组．甲组进行静置培养，乙组进行振荡培养，结果发现________组培养的发酵菌生长速度快，原因是________、________．

2 近年来，有科学家把来自于动物体的精子注入到去掉DNA的卵细胞中，获得重组细胞，进一步培育出“孤雄单倍体胚胎”．

(1)该过程用到的技术手段主要有________、________．

(2)将重组细胞培育为胚胎的过程中，除必要的营养条件、适宜的pH和温度外，还需保证其处在________的环境下，同时提供一定量的O₂和CO₂，其中CO₂的主要作用是________．

(3)科学家发现成活的“孤雄单倍体胚胎”细胞中含有的性染色体均为X染色体，分析可能的原因是________．拿出任何一个“孤雄单倍体胚胎”细胞，都可当作精子使用，使卵细胞受精，并生下正常小鼠，可能的原因是________．

(4)有人认为这种“人造精子”的基因可以被加工，比如敲除或增加某个基因，这使得科学家能方便地制造出实验所需要的小鼠模型，该过程用到的工具酶主要有________、________．

    下图表示的是“DNA的粗提取和鉴定”实验的实验步骤。请回答下列问题：

（1）取鸡血时，需要在容器中加入一定量的柠檬酸钠，目的是              。

（2）步骤①和步骤⑤中加蒸馏水的目的分别是               和             。

（3）步骤⑥应该弃去的是        ，步骤⑧加入冷酒精的作用是               。

（4）如果步骤⑩中的A试管加入含DNA的NaCl溶液和二苯胺，则B试管中加入的是

                                      。A试管的现象是                     。

40【生物——选修3：现代生物科技专题】（15）

    EPSPS是叶绿体中的一种酶，它能催化芳香族氨基酸的合成；草甘膦是一种除草剂，它能竞争性抑制EPSPS的作用，而使植物死亡，科学家将EPSPS基因转入大豆，使其在大豆细胞表达更多的EPSPS。下图为转基因大豆在研发过程中步骤和转化过程如图所示，回答相关问题：

（1）EPSPS基因导入大豆细胞的方法是                        。

（2）EPSPS基因应转移至土壤农杆菌的            ，将重组质粒导入土壤农杆菌时，一般要用         处理土壤农杆菌。然后在一定条件下将外植体接种在含              培养基上培养，EPSPS基因转入植物细胞并整合到植物基因组中。

（3）将上述过程获得的外植体接种在含            的培养基中培养形成抗性外植体，经过               形成愈伤组织。

（4）可用                方法测定EPSPS基因是否整合到大豆基因组中；如何检测转基因植株是否具有抗药性状                             。

【生物——选修3：现代生物技术专题】

下图是利用基因工程培育抗虫棉的过程：

请回答下列相关问题：

（1）获得的Bt毒蛋白基因可通过PCR技术扩增，扩增Bt毒蛋白基因需要的成分包括DNA母链、________、DNA聚合酶以及引物，加入的DNA聚合酶应具有________的特点，加入引物的作用是________。PCR一般要经过三十多次循环，每次循环可以分为变性、复性和________三步。

（2）过程①表示________，过程③表示________。确定抗虫棉植株具有抗虫特性的方法是________。

科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草。如图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请分析回答：

(1)①过程获得的抗盐基因可用PCR技术进行扩增，该技术必须用________酶，所需的原料是_____________。PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、________和________三步。

(2)已知几种限制酶识别序列及其切割位点如表：

 用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是__________________________________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用____________________酶对外源DNA、质粒进行切割。

(3)图中⑤、⑥依次表示组织培养过程中抗盐烟草细胞的________、________过程。

(4)为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的________作探针进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是______________________________________________________________________________________________________________________。

请根据以上图表回答下列问题。

（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是                          。

（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？_______________。

（3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？     。

（4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为               。

（5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。

①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到________种DNA片断。

②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到________种DNA片断。

为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜叶片细胞并获得了转基因油菜品种。

（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用             技术从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，所含三种限制酶（ClaI、SacI、XbaI）的切点如图所示。则用      和        酶处理两个基因后，可得到     端与    端（填图中字母）相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入图所示Ti质粒的T-DNA中，构建     并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含     的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再将其制备成用于转化的侵染液。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过植物组织培养技术，可培育成转基因油菜植株。

（4）用     法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达

据图回答：

（1） 获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在                酶的催化作用下，合成互补的单链DNA，然后在                    的作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的                序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的                     序列，再通过化学方法合成所需基因。

（2） 利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有              、             、4种脱氧核糖核苷三磷酸和                  ，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

（3） 结构B的基本组成单位是                      ，由A和载体B拼接形成的C通常称为                       。

（4）在基因工程中，常用Ca²⁺处理D，其目的是                                   。

（1）图中②所示的生物技术的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，这是因为________。

（2）重组细胞培养成囊胚过程所用的培养液与植物组织的培养基在成分上的主要区别是前者必须含有________。重组细胞培养过程中所需要的基本条件包括充足的营养、________、________、气体环境。

（3）④所示的生物技术名称是________，若想得到大量健康的胰岛B细胞的胰岛素基因，可利用________技术。

（4）图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是________。该种基因治疗所属类型为________。