（1）获取绿脓杆菌单菌落：

    配制适于绿脓杆菌生长的培养基，培养基中的营养成分一般含有______、氮源、生长因子、水和无机盐，调节pH至7，灭菌处理，待培养基冷却至50℃时，在_________附近倒平板。经过选择培养、鉴别等步骤获得单菌落。

（2）检测绿脓杆菌对不同抗生素的敏感性：

    取该单菌落适当稀释，用___________法接种于固体培养基表面，使其均匀生长，布满平板。将分别含等剂量的比阿培南、美罗培南、头孢菌素和碳青霉烯类抗生素的相同大小的小滤纸圆片均匀置于该平板上的不同位置，适宜条件培养一段时间，结果是含不同抗生素的滤纸片周围均出现透明圈（如上图），这说明绿脓杆菌对上述抗生素________（填“敏感”或“不敏感”）；含头孢菌素的滤纸片周围的透明圈比含美罗培南的小，这说明绿脓杆菌对头孢菌素的敏感性比美罗培南________（填“强”或“弱”）；含比阿培南、碳青霉烯类的滤纸片周围的透明圈也比含美罗培南的小，且比阿培南透明圈中出现了一个菌落，请推测此菌落产生的可能原因：一是________________，二是_________________。

（3）根据上述实验结果，为达到抗绿脓杆菌的目的，对于该患者来说最好应选用抗生素_____________。

(一)酵母菌是来源于自然界的菌种，它种类繁多、分布很广、繁殖极快。如何筛选、纯化、诱导对葡萄酒发酵有利的酵母菌种，是酿酒师们长期研究的课题。

(1)像其他微生物一样，酵母需要适当的营养和合适的环境条件，培养时培养液中的营养物质主要有_____________________等。(要求回答4种营养物质)

(2)从含有酵母菌、醋酸菌、蓝藻的培养液中分离出酵母菌，最简单的培养方法是：在_______并且________条件下进行培养．

(3)为筛选和纯化酵母菌，根据用途应选用________培养基，常用的接种方法____________和 ____________．扩大培养过程中需要对酵母菌进行计数，取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计了三个平板，菌落数分别是200、180、220．则样品中微生物的数量为_________个/mL．该统计结果_______（低于、高于）实际值,原因是___________________________________________。

(二)某植物园中种植的有菊花、玫瑰等花卉，还有葡萄、橘子等水果，其中玫瑰、橘子都可以作为植物芳香油提取的原料。请回答下列问题:

(1)植物芳香油的提取方法有___________、压榨和___________等。

(2)玫瑰精油适合用________法提取，其理由是玫瑰精油具有易挥发、难溶于水、化学性质稳定的特点。蒸馏时收集的蒸馏液不是纯的玫瑰精油，而是_______。

(3)橘皮精油的提取原料是橘皮，但橘皮易焦糊，宜采用_____法提取橘皮精油，其中将柑橘皮干燥去水，并用石灰水浸泡，其目的是_________________。

为了调査成都自来水的水成情况，某研究小组对自来水水样中的细菌含量进行了测定，请回答下列问题：

（1）在微生物的培养过程中，实验室对培养基灭菌常用的方法是       。为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养基      培养。

（2）若小组采用平板划线法分离水样中的细菌，划线时落在培养基上共画了5个区域，则共需要    次灼烧接种环。

（3）检测自来水中大肠杆菌的数量,可选用伊红美蓝培养基，伊红美藍培养基除了为大肠杆菌的生长繁殖提供水和碳源外，还可以提供      等基本营养成分。该培养基从功能方面属于       培养基。

（4）为了保证居民生活饮用水的安全，经常需要测定饮用水中大肠杆菌的数目。具体操作是将已知体积的饮用水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌的菌落呈现      ，根据菌落的数目，计算出饮用水中大肠杆菌的数量，这种测定细菌的方法称为            。

（5）该研究小组在统计菌落数目时，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，如果接种后一个平板经培养后的菌落分布如图所示，推测接种时可能的操作失误是        。

乳酸菌是一种厌氧型细菌，以下为乳酸菌筛选的步骤：

①制备乳酸菌筛选培养基（MRS培养基）（成分：蛋白质、牛肉膏、无机盐、葡萄糖和水） 

②调节pH，并将NRS培养基和CaCO₃溶液灭菌后混合，倒平板制备培养基。 

③梯度稀释样品，选择合适的稀释倍数接种。 

④挑选产生____的菌落。 

请回答下列问题： 

（1）乳酸菌常用于制作泡菜，用于制作泡菜的泡菜坛要在坛盖边沿的水槽中注满水，其目的是_______________________，制作过程中亚硝酸盐含量的变化是_________________。 

（2）MRS培养基中蛋白胨可以作为乳酸菌的碳源和氮源，乳酸菌筛选过程中所用的接种方法是__________________。

（3）上述实验步骤②制备而成的培养基因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶培养基中的碳酸钙，上述实验步骤④挑选产生____________的菌落。

（4）若要长期保存乳酸菌，菌液中常需要加入一定量的_________________（填“蒸馏水”、“甘油”或“碳酸钙”），且要放置在        （填“-5”、“-20”或“-100”）℃的冷冻箱中。若要短期保存乳酸菌，可将菌种接种到试管的        （填“溶液中”、“固体培养基表面上”或“固体斜面培养基上”），菌落长成后，将试管放置在        （填“-4”、“0”或“4”）℃的冰箱中保藏。

牛奶是微生物生长的良好培养基，未经消毒处理的牛奶中往往存在多种细菌，有些细菌可引起相关疾病，如具有高度耐盐性的金黄色葡萄球菌，可引起人类患肺炎、肠炎等疾病。因此，牛奶在饮用前需对其进行消毒，并对消毒后的牛奶中的细菌进行检测。已知金黄色葡萄球菌在血平板(培养基中添加适量血液)上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。如图1所示为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，请回答下列问题：

                                                                  图1

(1)对于生鲜牛奶可用巴氏消毒法进行消毒，使用这种方法的好处是           。功能上看该培养基属于____________培养基，用此培养基进行培养的主要目的是                      。

(2)在检测牛奶中细菌含量变化时进行了如图2所示操作：

                                             图2

若用该方法培养设置了3个培养皿，菌落数分别为35、33、34，则可以推测每毫升生牛奶中含细菌__________个，运用这种方法统计的结果往往较实际值________(填“偏大”或“偏小”),原因是__________________________________________________________________________________。

(3)金黄色葡萄球菌在血平板(培养基中添加适量血液)上生长时,可破坏菌落周围的红细胞,使其褪色。图1所示操作中在血平板上的接种方法是___,_______,经多次规范操作,重复实验,血平板上均出现____________的菌落,可初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌,但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带,因此,要对本操作进行完善,完善的方案是                                 。

手机高温、潮湿的环境非常适合细菌的生长，由大肠杆菌引起的食源性疾病日渐成为社会比较关注的公共卫生问题。为了了解手机上大肠杆菌的种类及分布情况，某兴趣小组进行了如下实验步骤。请进一步完善实验内容并回答相关问题：

（1）实验步骤：

①配制含有________、水、无机盐的固体培养基，并在培养基中加入少量________（使大肠杆菌菌落呈现黑色）；

②从10名学生的手机正、反面采集样品，分别接种至灭菌的培养基上，在37℃恒温培养箱中培养24～48h，选取________的菌落；

③将接种针用________法灭菌后，将②中选取的菌落接种到________（填“固体”或“液体”）培养基，在恒温摇床上培养24h，使细菌大量繁殖；

④用________法将③过程所获得的细菌接种到培养基上，分别统计菌落的种类和数目；

⑤根据菌落的特征进一步鉴定大肠杆菌的类型。

（2）上述实验步骤中，从用途看，①所用培养基属于________培养基。

（3）上述实验步骤④统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是________。

土壤酶是由土壤微生物产生的，具有催化作用的一类蛋白质，如脲酶、蔗糖酶等。土壤酶易受到环境中外源物质（如除草剂、重金属、肥料等）的影响。科学家研究了氟磺胺草醚和甲咪唑烟酸两种除草剂对土壤中脲酶和蔗糖酶活性的影响。

（1）研究者从近年________（填“喷洒”或“未喷洒”）过除草剂的环境中选取表层土壤作为实验样品。

（2）各实验组称取200g的土壤置于棕色广口瓶中，分别添加等量的不同质量浓度的除草剂溶液，同时设置空白对照组。广口瓶用________（填“脱脂棉”或“保鲜膜”）封口，置于________中培养。分别在培养不同天数后取样，测定土壤中脲酶和蔗糖酶的活性。结果如下表所示。

（3）本实验的自变量是处理时间和________。实验结果显示，两组除草剂中的________的各实验组对土壤脲酶活性的影响随时间变化，均呈现“抑制-激活-抑制”的趋势。对土壤蔗糖酶活性激活率最高的处理条件是________。

（4）欲从上述土壤中筛选出蔗糖分解菌或尿素分解菌，则应将土壤浸出液采用________法接种到经________灭菌法处理的相应的固体平板培养基上。

工业生产中会产生一些含碳有机废水，某细菌X在生物处理废水中能发挥很大作用，现要对其进行筛选。

(1)应选用上表中的 (填图中字母)培养液，解释不选用其他培养液的原因：a   ，b 。

(2)接种前培养基必须进行 灭菌，为确定培养基灭菌是否彻底，可设置的 空白培养基为对照组；若要制作平板，常在培养液中加入   作为凝固剂，培养时，需将平板 放置。

(3)为获得单个菌落，某同学将细菌X接种到正确的培养基中，经培养后，其中一个平板的菌落分布如图所示，该同学的接种方法是    ，所用的接种工具是         ，该同学可能的操作失误是          。

(4)对细菌X计数时，可吸取菌液1ml稀释1000倍，然后吸取稀释后的菌液0.2ml，接种于平板上培养，一段时间后观察到三个平板上的菌落数为61、62、63，则该菌液中的细菌X数量约为        个/ml。

血栓主要由不溶性的纤维蛋白等物质组成。纳豆激酶(NK)是一种在纳豆发酵过程中由纳豆菌产生的蛋白酶，它不但能直接作用于纤维蛋白(A过程)，还能间接激活体内纤溶酶原(B过程)。如图是有关纳豆激酶溶栓机理简图，请据图回答下列问题。

(1)研究NK直接水解作用：给定纤维蛋白平板，将______________滴加其上，若出现相应的溶解圈，则可说明________________________________。

(2)NK的间接作用是通过________________________________________激活体内纤溶酶原，增加纤溶酶的量和作用，溶解血栓。

(3)请根据下列给出的实验材料，比较NK与内源性纤溶酶的溶栓效果，并补全表格空白位置上的相应内容。供选实验材料：NK溶液、内源性纤溶酶溶液、纤维蛋白块、蛋清溶液、缓冲液、双缩脲试剂、量筒、试管和秒表。实验步骤：(“＋”表示添加，“－”表示未添加)

①表格中A处添加的物质是______________，B处添加的物质是________________。

②实验结果的鉴定所用的观察方法是________________________________________。