③统计原生质体数量，结果如下。

分析回答：

（1）步骤②中，加酶液的目的是_______________________，洗涤时选用渗透压稳定剂的理由是______________________________________。

（2）结果表明，制备红豆杉内生真菌原生质体的适宜条件是__________、________、_______。

（3）检验原生质体再生能力，需要配制再生固体培养基，培养基灭菌常采用___________ 法，灭菌后需要冷却到_______℃左右才能用来倒平板。

（4）实验中将收集到的原生质体浓度为30×10⁶个/mL培养液先稀释10⁴倍，再各取0.1mL稀释液分别均匀涂布在3个再生固体培养基上培养。一段时间后，统计得到的菌落数分别为：27、21、24。则原生质体再生率（能再生的原生质体数占全体部原生质体的比例）约为________________。

下图是利用工程菌(大肠杆菌)生产人生长激素（由人垂体细胞产生的一种蛋白质类激素）的实验流程。所用的pBR322质粒含有限制酶pstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切点各一个，且三种酶切割形成的黏性末端各不相同，而Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因。请据图回答以下相关问题：

（1）过程①所用细胞是        ，过程②所用的原料和酶分别是                   。

（2）人生长激素基因在经③处理之前需经过PCR扩增，扩增前需要人工合成     种引物备用，扩增时应在PCR扩增仪中加入          用以催化互补链的合成。

（3）若人生长激素基因两端具有限制酶pstⅠ识别序列，切割人生长激素基因和pBR322质粒时只用限制酶pstⅠ的目的是确保产生            ，切割时断开的键是           。

（4）过程④所用的酶是            ；过程⑤应选择                    型的大肠杆菌作为受体细胞，为提高转化率，首先用    处理大肠杆菌使其成为感受态细胞。

（5）若用限制酶PstⅠ切割，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，再将甲培养基上的单个大肠杆菌接种到丙培养基上，待形成12个菌落后，将相应菌落的一部分转接到乙培养基的相同位置上。一段时间后，菌落的生长状况如图乙、丙所示。将三角瓶内的大肠杆菌接种到甲培养基上的目的是筛选含           基因的大肠杆菌；接种到培养基乙上能存活的是导入含              质粒的大肠杆菌。生产人生长激素的工程菌应从丙培养基的菌落中选取，选取的依据是                        。

[生物——选修1：生物技术实践]

胡萝卜素可以预防白内障、增强视力，还可以预防夜盲症，同时也是一种常用的食用色素。可以从微生物和胡萝卜中进行提取，过程如下。请回答下列问题：

（1）若要得到纯化的酵母菌R，常采用的分离方法是________。配制培养基时，灭菌与调节pH的先后顺序是________。

（2）胡萝卜含有的胡萝卜素中，最主要的是________，该胡萝卜素在人体内可以转变成两分子________。

（3）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好温度和________以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用________（方式）加热以防止温度过高；现有乙醇和乙酸乙酯两种溶剂，应选用其中的________怍为胡萝卜素的萃取剂，不选用另外一种的理由是________。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

去水卫矛醇是以从美登木（一种常绿灌木或小乔木）中提取的卫矛醇为原料合成的一种药物，对动物移植性肿瘤有广谱抗肿瘤活性，能抑制DNA及RNA合成，可直接杀伤慢性粘细胞白血病的幼稚粒细胞，并能显著抑制骨髓造血功能，使血红蛋白含量降低，红、白细胞数目减少。请回答下列相关问题：

（1）为获取更多的卫矛醇，科研人员对美登木进行了一系列研究工作，如图所示：

①获得C植株的技术手段是________。繁殖方式是________。如果利用此技术获得卫矛醇，也可以用________（按物理性质分）培养基培养________，然后在培养液中提取。

②利用A植株育种的优点是________。D植株的培育过程所用的主要原理有________，一般情况下其体细胞最多可有________个染色体组。

（2）为减弱在治疗用药过程中去水卫矛醇的毒副作用，可以让其和单克隆抗体相结合制成“________”。这一过程利用了单克隆抗体的________的特性，产生单克隆抗体的细胞叫________。

[选考]I:某研究小组为了生产梨酿制醋酸，具体流程如图所示，请回答：

 （1）图中乙过程可加入    酶，为证明该酶的效果，可分别取等量浑浊的梨汁和澄清的梨汁，各加入等量的    ，预计后者出现的沉淀物比较少。

（2）适宜条件下进行酒精发酵，发酵完毕的标志是     ，待沉淀后，可用    （方法）将上清液（即果酒）取出。若培养液酒精浓度超过    时，酵母菌会死亡。

（3）若用于醋酸发酵的醋杆菌被杂菌污染，欲获得用于醋酸发酵的醋杆菌菌种，常用方法是           。

II:某研究所为了加快优良种牛的繁殖速度，采用了以下方法，请据图回答：

（4）胚胎移植能提高优良性状动物繁殖率的原因之一是：对甲牛进行[a]    处理，一次受精能获得多个受精卵，    (“一”或“多”)头丙牛帮助完成丁牛胚胎发育过程，让甲牛和乙牛专门提供胚胎。

（5）若丁牛是乳汁中含有人干扰素的转基因牛，则上述过程要改变或增加一些环节，如需要将人干扰素基因作为目的基因与适当的载体结合，过程中需要使用两种工具酶分别是  和  ，结合成功并导入受体细胞；为了便于检测目的基因是否导入受体细胞，载体上要有  

（6）若丁牛是乳汁中含有人干扰素的转基因牛，下列叙述中，错误的是  

 A．丁牛的遗传物质只来自甲和乙牛  

 B．可选受精卵作重组DNA的受体细胞

 C．胚胎移植之前需要对胚胎进行检测和筛选

 D．需用含不同成分的培养液来培养不同时期的早期胚胎

（7）若采集丁牛的乳腺细胞，用  处理，可分散为单个的细胞悬浮液，把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术，叫     。未经克隆化的细胞系具有异质性。

酸菜，古称菹，《周礼》中就有其大名。制作酸菜的初衷是为了延长蔬菜保存期限。请回答： 

（1）酸菜制作起主要作用的微生物是_____________。但是在发酵初期，很多杂菌会大量繁殖，其中导致泡菜水的表面长白膜的微生物                      。 

（2）实验室可采用                           法进行菌种纯化，所用培养基需经_________________法进行灭菌。 

（3）为了保持所获得菌种纯净，需要进行菌种的保藏。对获取的菌种通常是在_________条件下短时间保藏，也可以利用____________的方法长期保存。

（4）市场上购买的真空包装酸菜，在没有发生漏气状态下发生了“胀袋”现象，A同学怀疑是杂菌污染导致的，B同学怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，说出你支持谁的观点并说出理由。支持            ，(1分)理由是                     。 

(1)人们常从土壤中分离纤维素分解菌，对应的实验流程是：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品接种到________培养基上→挑选产生________的菌落．

(2)微生物培养时，将微生物接种到固体培养基上的方法有________和________，这两种方法所用的接种工具在使用前应分别进行________处理．

(3)葡萄糖 酒精，该阶段常用的发酵菌是________．发酵期间，培养液温度应控制在________，发酵装置必须密封的原因是________．

（1）磷元素除了形成植酸外，还可以出现在下列______________分子或结构中(多选)。

A. 核糖      B. ATP       C. 核糖体       D. 核膜

（2）种植芦苇能有效抑制水华的发生，表明芦苇与引起水华的藻类关系是________。

（3）若植酸酶是由20个氨基酸形成的肽链，其中氧原子至少有________个，若将其水解成10个二肽，则肽键将减少________个。

（4） 植酸酶可降解植酸，在谷物类饲料中添加植酸酶可提高饲料的营养成分的利用率。酵母菌中植酸酶的活性较高。下图是从不同类型酵母菌的发酵液中提取植酸酶的工艺流程。据图回答：

①植酸酶____________(Ⅰ/Ⅱ)属于分泌蛋白。

②若植酸酶Ⅰ和Ⅱ的肽链组成不同，其差异体现在_______。

③提纯的植酸酶需做活性条件测定，右图为测定结果。图中的自变量可为________(答一种)；因变量可以通过测定___________来表示。

（1）酸菜制作起主要作用的微生物是__________。但是在发酵初期，很多杂菌会大量繁殖，其中导致泡菜水的表面长白膜的微生物是_________________。

（2）在对该菌种进行培养时，与常规培养基相比还需要额外在培养基中添加______________；在泡菜的腌制过程中，要注意控制腌制的时间、温度和_____________，否则容易造成细菌大量繁殖。

（3）为了保持所获得菌种纯净，需要进行菌种的保藏。若采用临时保藏，则应将菌种接种到试管的__________________上，放入4℃冰箱中可保藏3～6个月；若要长期保存，可将菌液与灭菌的_____________混匀，放在-20℃的冷冻箱中保存。

（4）市场上购买的真空包装酸菜，在没有发生漏气状态下发生了“胀袋”现象，A同学怀疑是杂菌污染导致的，B同学怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，说出你支持谁的观点并说出理由。支持_____________，理由是___________________________________________________。