[生物——选修1：生物技术实践]

请回答下列与果酒制作、微生物的培养有关的问题：

（1）葡萄酒是一种由纯果汁发酵制成的酒精饮料。在酒精发酵过程中所利用的微生物是________，检测发酵是否产生酒精的试剂是________。

（2）酒精发酵所需的微生物可以从葡萄酒中分离获得，方法是：

第一步：配制琼脂固体培养基。

第二步：对培养基进行________灭菌。

第三步：采用________法进行接种。

第四步：在20℃左右温度下培养，挑选符合要求的________。

手机高温、潮湿的环境非常适合细菌的生长，由大肠杆菌引起的食源性疾病日渐成为社会比较关注的公共卫生问题。为了了解手机上大肠杆菌的种类及分布情况，某兴趣小组进行了如下实验步骤。请进一步完善实验内容并回答相关问题：

（1）实验步骤：

①配制含有________、水、无机盐的固体培养基，并在培养基中加入少量________（使大肠杆菌菌落呈现黑色）；

②从10名学生的手机正、反面采集样品，分别接种至灭菌的培养基上，在37℃恒温培养箱中培养24～48h，选取________的菌落；

③将接种针用________法灭菌后，将②中选取的菌落接种到________（填“固体”或“液体”）培养基，在恒温摇床上培养24h，使细菌大量繁殖；

④用________法将③过程所获得的细菌接种到培养基上，分别统计菌落的种类和数目；

⑤根据菌落的特征进一步鉴定大肠杆菌的类型。

（2）上述实验步骤中，从用途看，①所用培养基属于________培养基。

（3）上述实验步骤④统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是________。

一、[生物——选修1：生物技术实践]人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质——培养基，培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。

（1）培养微生物常用牛肉膏蛋白胨培养基，其中牛肉膏可以为微生物提供________（填“碳源”、“氮源”或“碳源和氮源”），培养基中常加入________作为凝固剂。

（2）培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加________，培养霉菌时需要将培养基的pH调至________（填“酸性”、“中性”或“碱性”）。如果要鉴定大肠杆菌，培养基中需要加入________，大肠杆菌的菌落呈现黑色；如果要纯化大肠杆菌，可采用平板划线法或________法进行接种。

（3）制作果酒时，在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。该过程中，缺氧、呈酸性的发酵液相当于一种________（功能）培养基，温度一般控制在________。

二、[生物——选修3：现代生物科技专题]

科学家利用基因工程技术创造出了“蜘蛛羊”、“抗虫棉”等转基因生物。请回答有关基因工程的问题：

（1）科学家要想成功获得上述生物，其实施基因工程的第一步是获取________，可采用________技术大量扩增上述物质。

（2）基因工程的核心步骤是________；其中启动子是________识别和结合的部位；终止子相当于一盏红色信号灯，使________（过程）在所需要的地方停止下来；标记基因的作用是________。

（3）检测目的基因是否翻译成蛋白质常用的方法是________法；在检测导入目的基因的棉花植株是否抗虫时，需要进行________水平的鉴定。

【生物——选修1生物技术实践】

  人们希望能借助纤维素酶将地球上最丰富、最廉价的可再生资源纤维素转化为能直接利用的能源和资源。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取．某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→（      ）→鉴别培养。

（1）请补充题干“（ ）”中的实验流程： ；找不到合适的取样环境，可采取的办法是                                                。

（2）选择培养的目的是                              ；研究人员用纤维素、硝酸盐、磷酸盐以及微量元素配制的培养基进行培养，其中加入的纤维素为微生物的生长提供 。

（3）为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以培养基上加入刚果红染液，将筛选获得的菌液稀释后用 法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生                            的菌落作为菌种进行扩大培养。

（4）扩大培养过程中需要对微生物进行计数。取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是180、200、160。则样品中微生物的数量为                       个/mL。该统计结果                  (低于、高于)实际值。

[生物—选修1：生物技术实践]

牛、羊等反刍动物的瘤胃中生活的微生物中，有些是能够以尿素作为唯一氮源，研究人员欲从牛的瘤胃提取液中分离这些微生物。结合所学知识回答下列问题：

（1）从瘤胃提取液中分离能够分解利用尿素的微生物，应使用________的固体培养基，配制培养基需要的基本步骤依次为________、称量、溶化、________、倒平板。

（2）为了既能够接种，又能够初步计数，可采用________法进行菌液接种，接种过程中使用________作为接种工具。

（3）某同学为了统计样品中微生物的数目，他选用10^－4，10^－5、10^－6稀释液进行涂布，每种稀释液都设置了3个培养皿。然后选择________的平板进行计数，但是统计的菌落数往往比活菌的实际数目________，这是因为________。

[生物——选修1：生物技术实践]

请回答下列与微生物有关的问题。

（1）土壤中具有分解尿素的细菌，此类细菌能产生脲酶，该酶能将尿素分解成________。

（2）为从富含尿素的土壤中分离获得尿素分解茵的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：

（注：“＋”表示有，“－”表示无）

培养基甲________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是________；培养基乙________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是________。

（3）如分别取0.1mL已稀释10²倍的水样分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到产生脲酶的细菌的菌落数分别为161、155、158、170，则每升原水样中该细菌数为________个。

（4）纯化细菌时使用的培养基一般用________法灭菌，________（填“可”或“不可”）用加入抗生素的方法防止杂菌感染。

（5）某小组采用平板划线法分离某样本的该细菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是________。

（6）尿素分解菌在－20℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的________（填“石蜡”“蒸馏水”或“甘油”）。

[生物——选1生物技术与实践]某同学配制含琼脂的牛肉膏蛋白胨培养基后，对培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌，当培养基温度下降到50℃时，在酒精灯火焰附近倒平板，待培养基冷却至室温，按下表处理：

将处理完毕的培养皿置于适宜温度下培养2～3天，观察每个培养皿中的菌落特征和数目。回答下列问题：

（1）上述实验的实验目的是          。若E组的培养基表面有菌落生长，说明了               。

（2）培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为微生物生长提供          和      。在酒精灯火焰附近”进行相关操作是为了                 。

（3）实验过程特别强调温度控制，请简要说明下列温控措施的目的：                                         

①“待培养基冷却至室温”的目的有                                             。

②“将处理完毕的培养皿置于适宜温度下培养”的目的是                                   。

（4）培养微生物时将培养皿倒置的目的是                                            。实验结束后，对使用过的培养基应进行                      处理。

[生物——选修1：生物技术实践]

牛奶是微生物生长的良好培养基。生鲜牛奶中的微生物情况反映了奶牛的健康状况,也影响奶制品的运输和贮藏。牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒,以杀死有害微生物。为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况,做如下图所示操作。用无菌吸管从锥形瓶中吸取1mL生牛奶稀释液至盛有9mL无菌水的试管中,混合均匀,如此再重复2次。请回答下列有关问题:

（1）巴氏消毒的方法是_______________,使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是______________________________。

（2）取最终的牛奶稀释液0.1mL滴在培养基上进行涂布,应选择的涂布工具是下图中的_______________。

（3）图中所示方法为稀释培养法,理想情况下,培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。若用该方法培养设置了3个培养皿,菌落数分别为35个、33个、34个,则可以推测生牛奶中每毫升含细菌数为_______________个。运用这种方法统计的结果往往较实际值_______________(填“偏大”或“偏小”),原因是_______________。

（4）消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死,若继续用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量,则在操作步骤上应做什么改动? _______________。

（5）从生牛奶取样培养得到的菌落中,混有各种杂菌,从中检测出大肠杆菌的方法是在培养基中加人_______________,菌落具有_____________特征的可以认定为大肠杆菌。

[生物——选修1：生物技术实践]

   某同学配制含琼脂的牛肉膏蛋白胨培养基后，对培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌，当培养基温度下降到50℃时，在酒精灯火焰附近倒平板，待培养基冷却至室温，按下表处理：

将处理完毕的培养皿置于适宜温度下培养2～3天，观察每个培养皿中的菌落特征和数目。回答下列问题：

（1）上述实验的实验目的是________。若E组的培养基表面有菌落生长，说明了________。

（2）培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为微生物生长提供________和________。

（3）实验过程中“待培养基冷却至室温”的目的有________。

（4）实验结束后，对使用过的培养基应进行________灭菌处理。

（1）由果酒制作转为果醋制作，需要改变的条件有哪些？                         。

（2）泡菜制作过程中，盐水要煮沸冷却待用，煮沸的目的是                          。

（3）纯化微生物常用的方法是                                   。

（4）按物理性质划分：没有加入凝固剂琼脂的是      培养基，一般用于微生物的工业生产:；只有在      培养基上才可观察到菌落。培养基中没有加碳源可选出     （自养或异养）微生物。