[生物—选修1：生物技术实践]

   为研究酸奶中的乳酸杆菌数是否达标，某同学做了如图所示的实验。请回答下列问题：

（1）为避免样本中菌体浓度过高，需要对样本用无菌水进行________处理。

（2）培养乳酸杆菌的固体培养基中，除了含有________、水和无机盐等主要营养成分外，还应加入适量的________和琼脂，在灭菌前，还需调节培养基的________。接种后，培养基置于（填“25～28℃”或“30～37℃”）恒温箱中培养。

（3）如图，测定菌落数时，该同学涂布了5个平板，培养后的菌落数分别是20、110、116、134和120，可算出每毫升样品中的菌落数是________个。

（4）用这种方法测定的乳酸杆菌菌落数比实际活菌数量________，因为________。

多氯联苯是一种有机致癌物质，容易累积在脂肪组织，造成脑部、皮肤及内脏的疾病并影响神经、生殖及免疫系统。多氯联苯为油状液体，污染土壤后，土壤呈现油状板结，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以             为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于              。

（2）对初步提取到的菌株要进行      ，一般操作方法有两种，下图是利用                    法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。培养一段时间后，如果出现菌落且菌落周围           消失或减少，说明该菌落中的菌株具有降解多氯联苯的能力。

（3）若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下用                 直接计数。若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是                                          。

（4）将1ml酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1ml稀释液经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、43、44，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为             。

[生物——选修1：生物技术实践]

请回答下列与微生物有关的问题：

(1)土壤中具有分解尿素的细菌，此类细菌能产生脲酶，该酶能将尿素分解成________。

(2)为从富含尿素的土壤中分离获得尿素分解菌的单菌落某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表)：

注：“＋”表示有，“－”表示无。

培养基甲________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是________；培养基乙________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是___________________________。

(3)如分别取0.1mL已稀释10²倍的水样分别涂布到四个琼脂同体培养基的表面进行培养，培养基记录到产生脲酶的细菌的菌落数分别为161、155、158、370，则每升原水样中该细菌数为________。

(4)纯化细菌时使用的培养基一般用________法灭菌，________(填“可”或“不可”)用加入抗牛素的方法防止杂菌感染。

(5)某小组采用平扳划线法分离某样本的该细菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是______________________________________________________。

(6)尿素分解苗在20℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的________(填“石蜡”“蒸馏水”或“甘油”)。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

回答下列与生物工程有关的内容

(1)基因工程技术中，________是将目的基因导入植物细胞最常用的方法，其中的Ti质粒上的T－DNA是指________。获得该基因后，将该基因在反应体系中扩增时需要舔加的有机物质有________。

(2)试管婴儿技术是指采用人工方法将卵子与精子从人体内取出并在体外受精，发育成胚胎后，再移植回母体子宫内，以达到受孕目的的一种技术。顺利受精必须满足两个条件来自父方的精子要进行________；来自母方的卵母细胞要________。

________(填生物技术)是培育试管婴儿最后一道工序。一般来说，该技术操作比较合适的时期是________。

(3)与传统方法生成的抗体相比，单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度高、________。在癌症治疗时，把抗癌细胞的单克隆抗体跟________相结合，制成的“生物导弹”，借助单克隆抗体的________作用，将药物带到癌细胞位置，将其在原味杀死。

(4)桑基鱼塘生态系统能充分利用废弃物中的能量，形成无废弃物农业，这主要遵循了生态工程的________原理。同时，通过饲养家禽、家畜，栽培食用菌，提高农民经济收入使保护环境和发展经济相互协调，这又体现了生态工程的________原理。我国西北一些地区年降雨量少，适官种植灌小和草，却被硬性规定种植属于乔木的杨树，致使许多地方的杨树长成半死不活状，结果防护林成为残败的“灰色长城”。其失败的原困主要是违背了________原理。

下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请根据表格回答。

（1）从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于_________。

（2）若根据用途划分，该培养基属于__________（填“选择”或“鉴别”）培养基。若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，培养基的营养成分必需怎样更改？

_________________，并用__________作为指示剂。

（3）在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行______；操作者的双手需要进行清洗和_______________。

（4）

图1和图2是培养某细菌的结果图，其对应的接种方法分别是：____________和____________，这两种方法接种后培养基上都可以得到由单个细胞繁殖所形成的________。图1所用的接种方法可用来对活菌进行计数。此外，测定微生物数目的另一种方法是_____________。

（5）以下微生物发酵生产特定产物时，所利用的主要微生物的细胞结构与大肠杆菌较相似的有__________。

A．制作果酒             B．由果酒制作果醋         C．制作泡菜              D．制作腐乳

（1）玉米秸秆预处理后，秸秆中的纤维素经C₁酶、C_X酶和          酶的协同作用下最终被 水解成葡萄糖；再经酵母菌发酵产生酒精。发酵过程中检测酵母菌的数量除可采用稀释涂布平板法

计数外，           法也是测定微生物数量的常用方法。

（2）在酸性条件下，发酵产生的酒精，与重铬酸钾反应呈现         色。在盐酸酸化条件下，泡菜腌制过程中产生的亚硝酸盐，与对氨基苯磺酸发生重氮反应后，与N—1—萘基乙二胺盐酸盐结合形成          色染料。在含           的培养基上培养大肠杆菌，菌落会呈现黑色。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入               ，因培养尿素分解菌后而变为红色。纤维素等多糖物质可以与          染料形成红色复合物。

2 （16分）当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，在一定的营养物质、激素和其它外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。影响菊花组织培养和月季花药培养的成功率的因素有材料的选择与培养基的组成。

（1）材料的选择：菊花的组织培养一般选择        植株的茎上新萌发的侧枝。在月季的花粉发育过程中，只有某一个时期（       期）对离体刺激敏感，为了挑选到该时期的花药，通常选择         的花蕾。要确定其中的花粉是否处于适宜的发育期，可用的方法有         和焙花青—铬钒法，后者能将细胞核染成            色。

（2） 培养基的组成：常用的MS培养基主要成分包括：大量元素、微量元素、有机物（如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素以及            ）等。在配制好的MS培养基中，常常需要添加植物激素。植物激素的浓度、使用的先后顺序以及用量的比例等都会影响实验结果。如同时使用生长素和细胞分裂素，出现的实验结果是               ；生长素用量比细胞分裂素用量比值低时，出现的实验结果是                 。     

（1）苯胺是致癌物质，土壤中有分解苯胺的异养型细菌，此培养基中的成分X除了为目的菌提供能源外，还能提供         （写全得分），该培养基从作用看属于        培养基。制备固体培养基时调节PH在           步骤后；对接种环进行灭菌的是方法                    。

（2）右上图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图。则获得图B效果的接种方法是              。运用A所示接种方法统计的菌落常常比活菌的实际数目        ，其原因是                               。在探究“酵母菌种群数量变化” 实验已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳液体的总体积为0.4mm³，观察到右上图中该计数室所示a、b、c、d、e  5个中格共有蓝藻80个，则1ml样液中约有蓝藻             个

（3）在以尿素为唯一氮源的培养基中加              可初步鉴定该种细菌能够分解尿素，原理用方程式表示为                                          .

图1
(1)分解尿素的细菌能分泌_______酶，能将尿素分解成________。

(2)培养基中为“目的菌”生长提供氮源和碳源的物质分别来自________和________。

(3)图中将细菌转到固体培养基上时，应采用___     _____法接种以获得单个菌落。初步筛选出来的菌种还需要用生化的方法作进一步的鉴定，鉴定方法是检测初步筛选目的菌种培养基的pH，若pH________(降低/不变/升高)，说明该菌种能够分解尿素。

(4)微生物的计数：运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是__________________________。

(5)微生物的鉴定：要从土壤样液中筛选出能降解除草剂(一种难以降解的含氮有机物)的细菌。已知：该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明。设计培养基配方时，从用途来看，除加入必需的营养成分外，还应____________；从物理性质来看，还应加入____________。接种培养后，依据培养基中是否产生____________来筛选能降解该除草剂的细菌。

&;   某生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答：

(1)培养基中加入尿素的目的是____，该培养基是____培养基（按功能分类）。 从同化作用类型来看的，该菌属于____。

(2)实验需要振荡培养，目的是____；转为固体培养时，常采用____的方法接种，获得单菌落后继续筛选。

(3)在实验过程中：①培养基、培养皿；②玻棒、试管、锥形瓶、吸管；③瘤胃中的液体。其中需要灭菌的是____（填序号）。

(4)分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学实验结果差异的原因可能有____（填序号）。    

①取样不同    ②培养基污染    ③操作失误     ④没有设置对照

(5)以尿索为唯一氮源的培养基培养“目的菌”后，加入____指示剂后变红色，说明“目的菌”能分解尿素。理由是__________________。

(6)为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，将接种的培养皿放置在37恒温培养箱中培养24h-48h，观察并统计具有红色环带的菌落数，结果如下表，其中____倍的稀释比较合适。

[生物——选修 1：生物技术实践]

下表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关问题：

（1）该种培养基可用来培养 ________的细菌。从用途看，这种培养基称为_______培养基。

（2）如果要通过统计培养基中的菌落数来估算样品中的细菌数，则在上述培养基中还需要添加作为凝固剂，接种时应采用法才能达到目的。这种方法统计到的是样品中_______的数目，除了这种方法，还有也是测定微生物数量的常用方法。在用不同浓度的稀释液培养得到的平板中，为保证统计的数目结果较为准确，一般选择菌落数在_______的平板进行计数。

（3）某同学从土壤中分离出目的细菌以后，若要对其作进一步的鉴定，可在上述的培养基中加入_______指示剂，培养该菌后，如果指示剂变_______，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。

 (1)自然界中①环节需要的微生物大多分布在__________的环境中。将从土壤中获得的微生物培养在以________为唯一碳源、并加入__________的培养基上，筛选周围有________的菌落。

(2)在如上所述的筛选过程中获得了三个菌落，对它们分别培养，并完成环节②，且三种等量酶液中酶的浓度相同，则你认为三种酶液的活性________(一定相同、不一定相同、一定不同)，可以通过__________________________进行定量测定。

(3)根据测定结果，①环节常选择木霉，则②中获得的酶是________酶。

(4)生产中可以满足④环节的常见菌种是________，为了确保获得产物乙醇，⑤环节要注意_________________  _  。