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            • 1． 已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶．脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产．回答有关问题：
              （1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用 ______ 染色．微生物A产生的油脂不易挥发，可选用 ______ （填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取．
              （2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以 ______ 为碳源的固体培养基进行培养．从功能上划分该培养基属于 ______ 培养基
              （3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用 ______ 直接计数；若要测定其活菌数量，可选用 ______ 法进行计数．
              （4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中， ______ ℃条件下该酶活力最小．为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕 ______ ℃设计后续实验．
              难度：较易
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            • 2． 谷物中淀粉酶活性是影响啤酒发酵产酒的重要因素．某科研小组为寻找啤酒发酵的优良原料，比较了小麦、谷子、绿豆萌发前后淀粉酶活性，其实验过程及结果如下．分析回答：
              ①谷物的萌发：称取等量小麦、谷子、绿豆三种谷物的干种子，都均分为两份，其中一份浸泡2.5h，放入25℃恒温培养箱，至长出芽体为止．
              ②酶提取液的制备：将三种谷物的干种子和萌发种子分别里于研钵中，加入石英砂和等量蒸馏水研磨、离心，制备酶提取液．
              ③反应进程的控制：分别取②制备的酶提取液1mL置于不同的试管中，加入lmL1%的淀粉溶液，25℃保温5min后，立即将试管放入沸水浴中保温5min．
              ④吸光度的测定：在试管中加入 ______ 、摇匀、加热，当溶液由蓝色变为砖红色后，用分光光度计依次测定各试管的吸光度．
              ⑤酶活性的计算：将测定值与标准麦芽糖溶液吸光度比对，计算出淀粉酶活性，结果如表：
              名称 小麦 谷子 绿豆
              未萌发谷物的淀粉活性/U•g-1 0.0289 0.0094 0.0074
              萌发谷物的淀粉酶活性/U•g-1 5 1.7645 0.0395
              （1）本研究的自变量是 ______ 、 ______ ．
              （2）步骤②中加入“石英砂”的目的是 ______ ；步骤③中立即将试管在沸水浴中保温5min的作用是 ______ ．避免因吸光度测定先后对实验结果的影响：歩骤④“？”加入的试剂是 ______ ．
              （3）实验结果表明，谷物萌发过程中淀粉酶活性 ______ ，其意义是 ______ ．
              （4）本实验对生产实践的指导意义是应优先选择 ______ 作为啤酒发酵的原料．
              难度：较易
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            • 3． 某科研小组开展紫外线诱变选育脂肪酶高产菌株的研究．原始菌株1444粗壮假丝酵母经连续两次紫外线诱变，反复筛选，得到的突变株Z6和Z8．在40℃、pH 7.5条件下测定所产脂肪酶活性，分别比原始菌株提高了l26%、150%．回答下列问题：
              （1）由于突变是不定向，突变导致脂肪酶活性变化的可能结果有 ______ ．
              （2）科研人员对上述三个菌株所产生的脂肪酶特性进行研究，获如下结果

              实验一：为测定脂肪酶在不同pH值条件下的稳定性，科研人员分别取上述三种菌株所产的酶液各20mL，分别与等体积的pH5～9的缓冲液混匀，置于4℃冰箱保存24小时后，将pH调至7.5，再加入等量的底物溶液，测定酶的相对活性．结果如图，与原始菌株1 444相比，z6和z8的酶在不同pH条件下的 ______ ．测定酶的活性的实验温度为 ______ ℃．
              （3）实验二：分别取上述三种菌株的酶液各20ml，置于50℃恒温水浴处理60min，每隔10min取样一次，测定酶活性，同时测定三个对照组的酶活性并进行比较．本实验目的是 ______ ，对照组所用的酶液应如何处理？ ______ ．
              难度：较易
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            • 4． 如图表示利用“果胶酶-酵母菌联合固定凝胶珠”生产红葡萄酒的部分过程，请问答下列问题．

              （1）海荡酸钠能作为固定裁体的特点是 ______ ，在联合固定果胶酶和酵母菌之前，对海藻酸钠所作的操作是 ______ ．
              （2）果胶酶在果汁生产中具有重要的作用，把果胶酶和酵母菌固定在一起生产红葡萄酒的重要意义在于 ______ ．
              （3）果胶酶通常先与戊二醛交联，然后与活化的酵母菌一起用海藻酸钠包埋固定，这是因为 ______ ．
              （4）在初级发酵时一般温度控制在 ______ ，在发酵过程中，尤其要随时监控和调整发酵罐中的温度和pH，使其在适宜的范围内波动，其主要目的是 ______ ．
              难度：较易
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            • 5． 嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：
              Ⅰ．利用大肠杆菌表达BglB酶
              （1）PCR扩增bglB基因时，选用 ______ 基因组DNA作模板．
              （2）图1为质粒限制酶酶切图谱．bglB基因不含图中限制酶识别序列．为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入 ______ 和 ______ 不同限制酶的识别序列．
              （3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为 ______ ．
              Ⅱ．温度对BglB酶活性的影响

              （4）据图2、3可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会 ______ ；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在 ______ （单选）．
              A.50℃B.60℃C.70℃D.80℃
              Ⅲ．利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性
              在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率．经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因．
              （5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中 ______ （多选）．
              A．仅针对bglB基因进行诱变     B．bglB基因产生了定向突变
              C．bglB基因可快速累积突变    D．bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变．
              难度：较易
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            • 6． 1963年诺和诺德公司向洗涤剂中加入碱性蛋白酶，推出了第一款加酶洗衣粉．碱性蛋白酶一般利用枯草芽孢杆菌生产．图甲、乙为某科研小组对碱性蛋白酶相关性质进行测试的结果．图丙、丁为两种常见的平板划线法；连续划线法和四区划线法，前者适用于纯化菌种较少的样品，后者适用于纯化菌种较多的样品．请回答下列问题：

              （1）由图甲、乙可知，碱性蛋白酶发挥作用的适宜条件为 ______ ．
              （2）图丁中依次进行四区划线，四区的面积要求为C＜D＜E＜F，F区面积最大的原因是 ______ ．每次划线后都要 ______ 接种环，注意F区划线不要与 ______ （填字母）区相连．
              （3）某兴趣小组欲从土壤中分离枯草芽孢杆菌，宜选择图 ______ 所示的方法划线培养，分离得到的纯化单菌落属于 ______ （填“种群”或“群落”）．
              （4）碱性蛋白酶是枯草芽孢杆菌生长后期向细胞外分泌的一种酶，与该酶合成有关的细胞器是 ______ ．若欲应用固定化技术提高该酶的利用率，减少产物中的杂质，则应采用 ______ 方法．
              难度：较易
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            • 7． 柑橘是重要的经济作物，经深加工可生产果汁、酒精、含胡萝卜素的食品添加剂．请回答下列相关问题：
              （1）在生产酒精的过程中，发酵温度控制在 ______ ℃．发酵过程中定期打开排气装置，目的是 ______ ．
              （2）可用 ______ 的方法提取柑橘中的胡萝卜素，将提取的胡萝卜素粗品通过 ______ 法进行签定．
              （3）柑橘加工产生大量皮渣，严重污染环境．研究发现，皮渣能被枯草杆菌分解，但发酵过程中产生的有机酸，导致pH下降，影响其分解效果．通过辐射处理枯草杆菌，筛选获得耐酸菌株 A、B．
              ①筛选菌株时，枯草杆菌生长繁殖所需要的主要营养物质有碳源、氮源、 ______ 四类，该培养基中果胶为唯一碳源，只有能将果胶分解成 ______ 的微生物才能生长．
              ②纯化菌株时，使用的涂布工具是 ______ ．取某一稀释液涂布了三个平板，其中一个平板无菌落，另外两个有菌落．造成无菌落的操作失误最可能是 ______ ．
              ③用分离得到的果胶酶进行了相关实验，结果如图．
              请据图分析：处理柑橘皮渣时，选用菌株 ______ ，理由是 ______ ．
              难度：较易
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            • 8． 为了探究从甲、乙、丙三种微生物获取的碱性淀粉酶的活性，兴趣小组的同学在科研人员的帮助下，从上述三种微生物提取了淀粉酶提取液（提取液中酶浓度相同），进行了如下实验．
              第一步：取四支试管，分别编号．
              第二步：按下表要求完成操作．并在表中各列的字母位置，填写相应试剂的体积量（mL）．
              试管1 试管2 试管3 试管4
              蒸馏水 2 2 2 A
              pH=8缓冲液 0.5 0.5 0.5 0.5
              淀粉溶液 1 1 1 1
              甲生物提取液 0.3
              乙生物提取液 0.3
              丙生物提取液 0.3
              总体积 3.8 3.8 3.8 3.8
              第三步：将上述四支试管放入37℃的水浴，保温1小时．
              第四步：取出上述四支试管，冷却后滴入碘液．
              第五步：观察比较各支试管溶液颜色及其深浅．
              实验结果如下：（“+”表示颜色变化的深浅，“-”表示不变色）：
              试管1 试管2 试管3 试管4
              颜色深浅程度 ++ - + C
              请回答下列问题：
              （1）填写表中的数值：A为 ______ ，C的颜色深浅程度为 ______ （用“+++”或“--”表示）．该实验作为实验组的试管是 ______ ，设置对照实验的目的是排除 ______ 变量对实验结果的干扰．
              （2）该实验的自变量是 ______ ，无关变量有 ______ （至少写出2种）．
              （3）除了用碘液检验淀粉的剩余量来判断实验结果外，还可以用 ______ 试剂来检测生成物．若用该试剂检验，还需要对试管 ______ 处理，才能据颜色变化深浅判断出实验结果．
              （4）根据上述结果得出的实验结论是：不同来源的淀粉酶，虽然酶浓度相同，但 ______ 不同．
              难度：较易
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            • 9． 请分析回答下列有关生物技术实践方面的问题：
              （1）植物组织培养技术基本操作的正确顺序是 ______ （填序号）．
              ①外植体消毒　②制备MS培养基　③接种　④培养  ⑤栽培　⑥移栽
              A．①→②→③→④→⑤→⑥
              B．②→①→③→④→⑤→⑥
              C．②→①→③→④→⑥→⑤
              D．①→②→③→④→⑥→⑤
              （2）植物组织培养中，在配制好的MS培养基中常需添加 ______ ，除此之外， ______ 等，也是影响植物组织培养的重要因素．
              （3）PCR反应过程中除DNA模板、引物、原料和酶外，还需要一定的 ______ 等条件．
              （4）根据果胶酶在果汁生产中的作用的系列实验结果回答下列问题：
              ①能正确表示温度对果胶酶活性影响的曲线是 ______ ．
              ②能正确表示pH对果胶酶活性影响的曲线是 ______ ．
              ③在原材料有限的情况下，能正确表示相同时间内果胶酶的用量对果汁产量影响的曲线是 ______ ．
              ④果汁发酵后是否有酒精产生，可用 ______ 来检验．在酸性条件下，该试剂与酒精反应呈现 ______ ．
              难度：中等
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            • 10． 我省气候适宜，适合葡萄的生长，甜美的葡萄除供人们食用外，还可做成葡萄汁饮料和葡萄酒．人们常利用酵母菌发酵葡萄生产葡萄酒，回答下列问题：
              （1）酵母菌异化作用的类型是 ______ ；在酿制葡萄酒时，加入果胶酶将果胶分解成可溶性的 ______ ，瓦解植物的细胞壁和胞间层，可以提高果汁的出汁率，并使果汁澄清，提高葡萄酒的品质．
              （2）在酿制葡萄酒时，葡萄汁需要经过消毒灭菌．但有人在葡萄酒的制作过程中，加入的新鲜葡萄汁没有经过灭菌处理，可是在制出的葡萄酒中基本检测不出酵母菌以外的杂菌，从生态学角度分析：一是大量的酵母菌在与杂菌之间的竞争中取得优势，二是果酒中的 ______ ，从而淘汰掉杂菌．检验酒精常用的方法是在酸性条件下，酒精和 ______ 反应，显示灰绿色．
              （3）为提高果酒的生产效率，做了对比实验．甲发酵罐中保留一定量的氧气，乙发酵罐中没有氧气，其余条件相同且适宜，定期测得的数据如图所示：

              甲发酵罐提供氧气的目的是 ______ ，实验结束时（12h），甲、乙两发酵罐消耗的葡萄糖量之比为 ______ ．实验后检测发现，尽管酵母菌菌种合适、原料充足、操作正确、发酵温度和pH值适宜，但酒精含量比预期低，可能的原因是 ______ ．
              （4）某同学用三种不同的果胶酶进行三组实验，各组实验除酶的来源不同外，其他条件都相同，测定各组的出汁量，据此计算各组果胶酶的活性的平均值并进行比较．这一实验的目的是 ______ ．
              （5）工业生产中可用酵母菌发酵生产果胶酶，生产过程中需将发酵液中的果胶酶用凝胶色谱法分离纯化，其原理根据 ______ 分离蛋白质．分离出的果胶酶还需进行酶活性的测定，以单位时间内果汁的 ______ 表示酶活性的高低．
              难度：较易
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