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            • 1. 常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵,而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精,但是对酒精的耐受能力差.科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母.请分析回答下列问题:
              (1)制备酵母菌培养基要进行倒平板操作,待平板冷凝后,要将平板倒置,其主要原因是:    
              (2)取从自然界中采集的葡萄,用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中,然后按图甲所示过程进行酵母菌的纯化培养.

              图乙是经过图甲过程A 纯化培养的结果,在培养基上接种时划线的顺序依次是    (用编号表示).研究者在图甲过程C 的操作培养过程中,得到了一个经培养后菌落分布如图丙所示的平板,推测接种时可能的操作失误是    

              (3)将培养基上的酵母菌菌株转接到仅以     为碳源的培养基中,无氧条件下培养一周后,有些酵母菌死亡,说明这些酵母菌不能利用木糖发酵.
              (4)从以上筛选得到的活酵母菌中提取DNA,利用PCR 技术大量扩增获得目的基因.若将1个目的基因分子复制10 次,则需要在缓冲液中至少加入    个引物.将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上,然后将所得的重组质粒导入酵母菌时,应选择缺乏     能力的酿酒酵母作为受体菌.
              (5)将经上述流程培育获得的转基因酿酒酵母接种在含    的培养基中进行酒精发酵能力测试.随着发酵的持续进行,若该酿酒酵母能够存活,说明它能    ,即说明所需菌株培育成功.
            • 2. (2016•洛阳模拟)(1)如图是利用    法进行微生物接种,把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面.
              (2)分析下面培养基的配方:NaN03、KH2P04、NaH2P04、MgS04•7H20、KC1、H20.若此培养基用于筛选分解尿素的细菌,则应除去上述    成分,并加入    和葡萄糖,以补充    源.
              (3)从胡萝卜中提取胡萝卜素时,通常在萃取前要将胡萝卜粉碎和    ,以提高萃取效率.鉴定萃取物中是否含有胡萝卜素时,通常可采用    法,在鉴定过程中需要用    作为对照.
              (4)橘皮精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会发生部分水解,使用水中蒸馏法又会产生    问题,所以一般采用压榨法.
            • 3. 有机化工原料氯苯不易降解,会污染环境,现欲从土壤中分离高效降解氯苯的微生物.回答下列问题:
              (1)为了获得能降解氯苯的微生物菌种,可在被氯苯污染的土壤中取样,并应选用以    为碳源的培养液进行选择培养.除含有碳源外,培养液还应含有    、无机盐和蒸馏水等.
              (2)将获得的3种待选微生物甲、乙、丙分别接种在1L含20mg氯苯的相同培养液中培养(培养液中其他营养物质充裕、条件适宜),观测从实验开始到微生物停止生长所用的时间,甲、乙、丙分别为33小时、15小时、46小时,则应选择微生物    作为菌种进行后续培养.
              (3)若要测定培养液中选定菌种的菌体数,既可用    直接计数,也可选用    法统计活菌数目,一般前者得到的结果    (填“>”、“=”或“<”)后者.
              (4)对选定的菌种进行细胞学检测,发现它没有具膜细胞器如线粒体等,则该菌种属于    生物,其产生的降解氯苯的酶蛋白是在    上合成.
            • 4. 某些细菌产生的脂酶可分解脂肪为游离脂肪酸.加在培养基中的维多利亚蓝可与脂肪结合成为无色化合物,如果脂肪被细菌产生的脂肪酶分解,则维多利亚蓝释出,呈现深蓝色.现有被检细菌,要检验其是否能产生脂酶.
              培养基名称:脂酶培养基
              蛋白胨:10g         酵母浸膏:3g
              氯化钠:5g          琼 脂:20g      
              维多利亚蓝(1:1500水溶液):100ml            
              玉米油:50ml        蒸馏水:900ml        
              pH 值:7.8
              方法:将被检细菌接种于脂酶培养基上,于35~37℃无菌培养24小时.观察检验结果.    
              (1)固体培养基的制备一般包括            灭菌和倒平板等步骤.    
              (2)被检细菌培养通常包括配制培养基→灭菌消毒→接种→培养.配制的培养基一般都含有水、        和无机盐,还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求.    
              (3)进行无菌操作的目的是    .常用的灭菌的方法有    灭菌、干热灭菌和    灭菌.对培养基进行灭菌的方法是    .微生物接种最常用的方法有        .    
              (4)请你预计检验结果和结论     若检验结果    ,则结论为被检细菌    .若检验结果    ,则结论为被检细菌    
            • 5. 根据微生物分离和培养的知识,回答下列问题:
              (1)分离纯化大肠杆菌的关键步骤是    ,该步骤常用的方法有两种:        ,其中一种方法是将菌液进行一系列的    ,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固定培养基的表面进行培养.
              (2)在微生物的实验室培养过程中,获得纯净培养物的关键是    ,因此需要对培养基和培养皿进行    处理,操作者的双手需要进行清洁和    
              (3)分离分解尿素的细菌的培养基中要以尿素为唯一    (填“碳源”或“氮源”).
            • 6. 回答下列有关微生物的问题.
              如图1显示微生物的接种实验中的一些步骤.

              (1)图中的接种工具的名称是    
              (2)解释步骤①和②的操作:
              步骤①中,为何要将接种工具灼烧至变红?    
              步骤②中,为何要将接种工具冷却?    
              (3)图示接种方法的目的是    
              分别用三个平板培养三种细菌(E.coli、S.albus、B.subtilis),然后在培养基上打出直径为3mm的孔,并在孔中加入一定浓度的甲抗生素,经过一定时间培养后,可以在孔的周围观察到一圈清晰区,此乃抑制细菌生长所致.测量清晰区的直径(如图2所示),数据如表.
              细菌不同浓度甲抗生素条件下清晰区直径(mm)
              5μg/mL甲7.5μg/mL甲10μg/mL甲15μg/mL甲20μg/mL甲
              E.coli710141616
              S.albus-581317
              B.subtilis5791419
              (4)比较10μg/mL甲抗生素和20μg/mL甲抗生素在控制E.coli和S.albus方面的效用.    
              (5)在控制S.albus方面,甲抗生素具有抑菌作用的最低浓度是多少?    
              (6)有人感染B.subtilis而患病.举出三项理由,解释为什么用25μg/mL甲抗生素治疗该病人是不明智的做法.
                  ;②    ;③    
            • 7. 据报道,三分之一的缺血性心脏疾病是由于高胆固醇造成的.研究发现某种乳酸菌能降低胆固醇,科研人员利用微生物分离培养技术来获得能高效降低胆固醇的乳酸菌.回答下列问题:
              (1)乳酸菌是一种原核生物,其发酵过程会以胆固醇作为    .取适量发酵的酸肉,剪碎、研磨然后加入无菌水稀释,目的是    
              (2)对乳酸菌的选择培养基进行的灭菌方法是.刚刚制作好的平板培养基需冷却后并倒立放置,目的是    
              (3)将选择的菌株接种到高胆固醇培养液中,一段时间后离心,测定    (填“上清液”或“下清液”)中的胆固醇含量,并通过与    比较,测定菌株降低胆固醇的能力.对利用胆固醇的乳酸菌菌种长期保存的方法是    
            • 8. 从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物实验过程如图所示,请据图回答下列问题.

              (1)本实验用到的培养基为    ,碳源为    
              (2)实验原理是    
              (3)①~③重复培养的目的是    
              (4)⑤的菌落中大部分是降解    的微生物.
              (5)⑥为    组,⑦为    组,设置⑥的目的是    
              (6)⑤~⑥采用    法接种到⑥的培养基中,在操作过程中为防止杂菌污染应注意的事项是    
            • 9. 塑料袋造成的“白色污染”早已成为地球公害,塑料袋的自然分解需要20-1000年不等.科学工作者从土壤中找到了一类假单胞杆菌,能将聚乙烯塑料的自然降解过程缩短至3个月,而且分解产物只有水和二氧化碳.从土壤中分离出聚乙烯降解菌的大致过程如图:

              (1)图中“…”表示对土壤悬浮液进行一系列的    ,目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在I号培养基表面形成单个    
              (2)从功能方面看,I号培养基属于      培养基,其作用是使目的菌能“脱颖而出”.如图采用的接种方法为    .使用Ⅱ号培养基的目的是使目的菌数目增多,培养基中必须包含水、无机盐、        等基本营养成分.
              (3)为避免杂菌污染培养物和环境,微生物培养的培养基在接种前和完成实验后都要进行    ;接种时要在    附近操作.
            • 10. 反刍动物瘤胃内栖息着许多以尿素为唯一氮源的微生物,为从瘤胃内成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌).请分析回答问题:
              (1)“目的菌”能分解尿素是因为它们能合成    .由于“目的菌”没有    系统,因此,其分泌该酶与真核细胞蛋内质的分泌方式不同.
              (2)从瘤胃中分离“目的菌”必须先制备以    为唯一氮源的培养基,这种培养基属于    培养基(按功能划分).在该培养基中加入    指示剂,若指示剂变红色,可以初步鉴定该种细菌能够分解尿素.
              (3)在培养“目的菌”的实验过程中需要振荡培养,原因是    
              (4)对获取的“目的菌”通常是在    条件下进行短时间内保藏,也可以利用    的方法长期保存.
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