①溶化  ②称量  ③计算  ④倒平板  ⑤灭菌  ⑥调pH  ⑦分装

乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖,具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下:

产乳糖酶微生物L的筛选 产乳糖酶微生物L的培养 乳糖酶的提取纯化 乳糖酶的固定化

(1)筛选产乳糖酶的微生物L时,宜用          作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是            。从功能上讲,这种培养基属于              。 

(2)培养微生物L前,宜采用            方法对接种环进行灭菌。 

(3)纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下,带电荷相同的蛋白质电泳速度越快,说明其分子量越              。 

(4)乳糖酶宜采用化学结合法(共价键结合法)进行固定化,可通过检测固定化乳糖酶的            确定其应用价值。除化学结合法外,酶的固定化方法还包括              、               、离子吸附法及交联法等。

(1)在样品稀释和涂布平板步骤中,下列选项不需要的是　　　　(填序号)。

①酒精灯　②培养皿　③显微镜　④无菌水

(2)在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

(3)向试管内分装含琼脂的培养基时,若试管口粘附有培养基,需要用酒精棉球擦净的原因是　　　　　　　　　　。 

(4)刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落(见图)。图中降解圈大小与纤维素酶的　　　　　　有关。图中降解纤维素能力最强的菌株是　　　　(填图中序号)。 

(5)研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4,在不同温度和pH条件下进行发酵,测得发酵液中酶活性的结果见下图,推测菌株　　　　更适合用于人工瘤胃发酵,理由是　 　　　　　　　　　　　　　　　　　。 

实验材料:若干个培养瓶、培养液、细菌M

(要求与说明:实验仅设一组;实验仪器、试剂、用具及操作不作具体要求;实验条件适宜)

请回答:

(1)实验思路:

①

(2)预测实验结果(设计一个坐标系,并绘制预测的细胞数、细胞外酶浓度和总酶浓度的变化曲线):

(3)测定总酶浓度时,应对细胞做 处理。 

(2)在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_____________________________。

II．有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。 
​

(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、______四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_________________________。

(2)与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和________，这些植物激素一般需要事先单独配制成________保存备用。

(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________________________________。

(4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是________________________，该实验设计是否合理？为什么？______________________。