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            • 1． 回答下列有关微生物和酶工程的问题．
              枯草芽孢杆菌盛产蛋白酶，后者在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值，且已大规模产业化应用．
              （1）在培养包括枯草芽孢杆菌在内的异养型微生物时，培养基营养成分应包括水和    （用序号组合回答）．
              ①淀粉  ②蛋白质   ③生长因子  ④葡萄糖   ⑤无机盐
              为筛选枯草芽孢杆菌的蛋白酶高产株，将分别浸过不同菌株（a～e）的分泌物提取液及无菌水（f） 的无菌圆纸片置于含某种高浓度蛋白质的平板培养基表面；在37℃恒温箱中放置2～3天，结果如图1．

              （2）大规模产业化首选的菌株是    ；菌株b提取物周围没有形成明显清晰区的原因是    ．
              图2显示枯草芽孢杆菌的蛋白酶和其它酶的热稳定性数据，即酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其酶活性．在该蛋白酶的工业化生产过程中，通常需对发酵液在60～70℃保温一定时间，再制备酶制剂．
              （3）在60～70℃保温一定时间的作用是    ．
              A．诱导蛋白酶的热稳定性
              B．有利于发挥蛋白酶的最佳活性
              C．裂解枯草芽孢杆菌细胞
              D．大幅度降低发酵液中其他酶的活性
              （4）枯草芽孢杆菌蛋白酶制备的合理工艺步骤应为    （选择正确的序号并排序）．
              ①过滤   ②干燥   ③破碎   ④浓缩．
              难度：中等
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            • 2． 牛奶中富含蛋白质，长期饮用有助于增强体质，但牛奶同时也是多种疾病的传播载体．国家标准是每毫升牛奶中细菌数小于30000个．以下是牛奶消毒及细菌检测实验．

              （1）图中步骤①称为    消毒法．步骤②是    ．
              （2）培养基中的蛋白胨可以为微生物提供    ．进行步骤③操作时，应选用下列中的哪种工具？    ．为了避免杂菌污染，此步骤应在    附近进行．

              （3）将接种后的培养基和作为对照的    同时放入37℃恒温培养箱中，培养36小时．取出后统计各平板的菌落数，结果如表所示．应该选择其中稀释倍数为    的平板进行计数，经过消毒后的牛奶中，细菌数大约是    /mL．
              牛奶稀释倍数10-210-310-4
              平板1菌落数87101
              平板2菌落数83121
              平板3菌落数85100
              难度：中等
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            • 3． 某同学利用自己所学的生物技术自制酸奶，实验方案如下：
              材料用具：纯牛奶、原味酸钠；带盖瓶子、勺子、可调温电饭锅．
              制作方法：
              （1）将瓶子（连同盖子）、勺子放在电饭锅中加水煮沸10分钟．
              （2）瓶子稍冷却后，向瓶子中倒入牛奶，再放入电饭锅中沸水浴加热10分钟．
              （3）待牛奶冷却至40℃左右（不烫手）时倒入牛奶量1/5的酸奶作“引子”，用勺子搅拌均匀，拧紧瓶盖．
              （4）将电饭锅温度调至40℃，继续保温7-8小时．
              请回答：
              （1）将瓶子等煮沸的目的是    ．
              （2）“引子”指的是酸奶中的    ，其在发酵过程中完成的主要化学反应是    （填反应式）．与该菌种比较，醋酸菌的代谢特点是    ．
              （3）牛奶冷却后才能导入“引子”的原因是    ，将瓶盖拧紧是为了保持    条件．
              （4）适量饮用酸奶有利于改善腹胀、消化不良等症状，其原理是酸奶中的微生物能分解消化道中的部分食物且    ．
              （5）另一名同学在重复相同实验时，为避免杂菌污染向牛奶中加入了青霉素，结果发酵失败，原因是    ．
              难度：中等
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            • 4． 利用葡萄汁生产的葡萄酒、葡萄醋深受市场欢迎．请回答：
              （1）葡萄酒制作的原理是利用酵母菌分解葡萄糖生成    ，该物质在    氧条件下转变成酒精．
              （2）某实验小组尝试使用罐头瓶在常温（21+3℃）下制作葡萄酒．开始时，向消过毒的罐头瓶中加入新鲜的葡萄汁是酵母菌的液体培养基，此培养基中一般都含有    营养物质．从微生物培养条件分析此培养基中除生长酵母菌外有可能长出霉菌但很少有细菌生长，理由是    ．葡萄汁装入瓶中时，要留出大约
              1
              3
              的空间．在以后的过程中，每隔12小时左右将瓶盖拧松一次（不是打开瓶盖），这样做的目的是    ．
              （3）若要培养野生的酵母菌，在接种的时候可以用穿刺接种或斜面接种，这两种方法的而核心问题都是要    ．
              （4）葡萄皮、籽中含有原花青素、葡萄皮素和大量葡萄风味物质等，这些物质易溶于乙醇、乙酸乙酯中，因此常采用    方法分离提取．
              （5））醋酸杆菌是生产葡萄醋必用的菌种，可以从食醋中分离得到纯化的醋酸杆菌．扩大培养醋酸杆菌时，一般采用平板倒置培养，原因是    ．
              难度：中等
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            • 5． 下列有关实验的叙述正确的是（　　）
              A．制备植物原生质体时可在适宜的高渗溶液中用酶解法去除细胞壁
              B．以苹果为原料酿制果酒和果醋时，应先提供氧气进行果醋发酵
              C．在外植体脱分化时，应通入足量的CO2以满足光合作用的需要
              D．利用稀释涂布平板法对大肠杆菌计数时需要借助于显微镜观察
              难度：中等
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            • 6． 运用所学知识回答下列与生物技术实践相关的问题．
              （1）某科普实验小组欲从石油污染的水域中筛选出能高效降解石油的微生物．请回答：
              ①从水体中分享纯化菌种时，若要获得纯净的菌株，常采用平板划线的方法进行接种，此过程所用的接种工具是    ，操作时采用    灭菌的方法．
              ②在筛选过程中，应将稀释接种于以石油为唯一碳源的固体培养基上，在微生物培养前，需对培养基进行    ，该培养基从功能上看属于    ．
              （2）进行月季花药离体培养时，选择合适发育时期的花粉能提高诱导成功率，确定花粉发育时期最常用的染色方法是    ．花药经脱分化产生胚状体还是愈伤组织主要取决于培养基中    ．
              （3）葡萄皮、籽中含有原花青素、葡萄皮红素和大量葡萄风味物质等，这些物质易溶于乙醇、乙酸乙酯中，因此常采用    法来分离提取，还可以用    和蒸馏等提取什物芳香油的方法．
              难度：中等
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            • 7． 有些细菌可分解原油，从而消除有原油泄露造成的土壤污染．某同学欲从污染的土壤中采用富集培养的方法筛选出高效降解原油的细菌、经过的一般步骤是采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定，实验过程如图13所示，请分析回答：

              （1）如图甲、乙是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法．

              图A所示的接种方法是    ，图B所示的接种方法是    ．
              （2）在筛选过程中，应将    接种于以    为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养培养基属于    培养基．
              （3）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理．现有1L土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL 液样至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释103倍．各取0.1mL已稀释103 倍的水样分别接种到图A的三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出样液中菌体数为    ．
              （4）①→③重复培养的目的是    ．
              （5）为筛选出高效菌株，可比较单菌落周围透明带区域的大小．一般透明带区域越大说明该菌株降解原油的能力    ．
              （6）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行pH调整，接种前要进行    ，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在    条件下进行．
              难度：中等
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            • 8． 发酵工程是通过大量培养微生物以生产某种产品．请回答下列问题：
              （1）欲从多种微生物中分离某种细菌并抑制其他微生物的生长，应使用    培养基．纯化菌种时可采用比较简单的    法进行接种，接种操作应在    进行．
              （2）纯化的菌种常采用固体斜面培养基临时保藏，该方法保存的时间较    ，而且菌种易    ．常用的凝固剂是    ．
              （3）从培养基所含的成分来看，从土壤中分离出固氮菌的培养基特点是    ，从土壤中分离出纤维素分解菌的培养基特点是    ．
              难度：中等
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            • 9． 为了获得纯度高的大肠杆菌，需要对大肠杆菌进行培养和分离．培养大肠杆菌一般用牛肉膏-蛋白胨-琼脂培养基．
              （1）称量时，由于牛肉膏比较黏稠，可以用    挑取，放在    上称量．由于牛肉膏和蛋白胨    ，称量时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖．
              （2）在牛肉膏-蛋白胨-琼脂培养基上的大肠杆菌能生长，说明培养基含有    等大肠杆菌生长所需的营养要素．
              （3）微生物纯化培养可以通过多种接种方法如    和    等，使大肠杆菌在固体培养基上形成单个    ，从而获得纯菌株．
              难度：中等
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            • 10． 金黄色葡萄球菌是一种耐高浓度实食盐的致病菌，为探究某天然植物抗菌液对金色葡萄球菌的抑菌作用，某实验小组按照以下实验步骤进行了相关实验．回答下列问题：
              （1）为防止杂菌污染，常用    法对固体培养基进行灭菌处理，为检测灭菌效果可对培养基进行    ．
              （2）将配制好的多组培养基均分为甲、乙两组，甲组加入适量的天然植物抗菌液，乙组加入等量的蒸馏水．将金黄色葡萄球菌菌液进行一系列的    后，采用    法分别接种到甲乙两组对应的培养基上，在适宜条件下培养一段时间后，观察比较不同组别的菌落数．由于金黄色葡萄球菌具有致病性，因此严格进行无菌操作，一方面是防止培养基被外界环境中的杂菌污染，另一方面也是为了防止    ．
              （3）在基本培养基中加入    可筛选出金黄色葡萄球菌，从功能上讲，该培养基属于    培养基．
              难度：中等
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