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            • 1． 多聚半乳糖醛酸酶PG能降解果胶使细胞壁破损，成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜．利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期．科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如图．据图回答下列问题：

              （1）若已获取PG的mRNA，可通过    获取PG基因．
              （2）构建基因表达载体时，用限制酶切割DNA后可能产生黏性末端，也可能产生    ，后者需用    （E．coli DNA连接酶、T4DNA连接酶）将双链DNA片段“缝合”起来．“缝合”的过程，就是恢复被限制酶切开的两个脱氧核苷酸之间的    的过程．
              （3）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有    的培养基进行筛选．
              （4）将转入反向链接PG基因的番茄细胞培育成完整的植株，需要用    技术；其中，愈伤组织经    形成完整植株．
              （5）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，培养24～48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，通过观察细胞是否发生    现象来鉴别细胞壁是否再生．
              难度：中等
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            • 2． 已知限制性内切酶XmaⅠ和SmaⅠ的识别序列分别为C↓CCGGG和CCC↓GGG．有关这两种酶及应用的叙述，错误的是（　　）
              A．这两种酶作用的底物都是双链DNA
              B．XmaⅠ切割DNA形成的黏性末端是-GGCC
              C．这两种酶识别序列相同，切割出来的都是平末端
              D．两种酶作用所需的最适温度和时间不同
              难度：中等
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            • 3． Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：

              （1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的    （结构）．
              （2）步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体．可以根据Rag2基因的    设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段．用Hind III和Pst I限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有    酶的酶切位点．
              （3）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的    ，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验．
              难度：中等
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            • 4． 我国科学家屠呦呦因青蒿素的研究荣获2015年诺贝尔生理学和医学奖．青蒿素是目前世界上最有效的治疗疟疾药物，为青蒿植株的代谢产物，其化学本质是一种萜类化合物，其生物合成途径如图1所示．正常青蒿植株的青蒿素产量很低，难以满足临床需求，科学家为了提高青蒿素产量，将棉花中的FPP合成酶基因导入了青蒿植株并让其成功表达，获得了高产青蒿植株，过程如图2所示．

              （1）研究人员从棉花基因文库中获取FPP合成酶基因后，可以采用    技术对该目的基因进行大量扩增，该技术除了需要提供模板和游离的脱氧核苷酸外，还需要提供    、    等条件．在基因工程中通常选择细菌质粒作为运载体，原因之一是    ；如果某质粒由1000个核苷酸组成，核苷酸平均分子量为a，则该质粒的质量为    ．
              （2）图2中的①为    ，形成过程中需要    等酶；棉花FPP合成酶基因能够和质粒连接成①的主要原因是    ．
              （3）若②不能在含有抗生素Kan的培养基上生存，则原因是    ．
              （4）由题意可知，除了通过提高FPP的含量来提高青蒿素的产量外，还可以通过哪些途径来提高青蒿素的产量？（试举一例）    ．
              难度：中等
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            • 5． 目前，科学家可以应用生物技术进行一些疾病的治疗，如器官移植、单抗诊断、基因治疗等．请回答下列问题．
              I、人体器官移植面临的主要问题有供体器官短缺和免疫排斥．
              （1）为了解决器官短缺的问题，科学家将目光集中在某种小型猪身上，但实现这一目标的最大难题是免疫排斥．同时，科学家发现人体内有一种DAF 蛋白，可以抑制免疫系统对外来细胞的攻击，于是有人提出用基因工程的方法对猪的器官进行改造从而减少排斥．在改造中，目的基因是    ，受体细胞一般选用    ，导入方法常用的是    ．
              （2）免疫排斥主要是由    细胞引起的，该细胞是在    （器官）发育成熟的．临床上通常通过使用免疫抑制药物来抑制该细胞的增殖从而提高器官移植的成活率．
              （3）自体器官移植可以避免免疫排斥，目前有些自体器官可以通过对患者的胚胎干细胞进行体外诱导分化形成．胚胎干细胞来源于    或原始性腺，也可以通过    技术得到重组细胞后再进行相应处理获得．
              Ⅱ、人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胚盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG 单克隆抗体可用于早孕的诊断．下图是抗HCG 单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答．

              （1）制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于    ．它能使小鼠产生分泌相应抗体的淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的    免疫．
              （2）在细胞内DNA 合成一般有两条途径，主要途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基瞟岭可以阻断此途径．另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经过酶的催化作用合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA 合成没有此辅助途径．利用DNA 合成途径不同的特点配制的HAT 培养基含有多种成分．若用a 表示骨髓瘤细胞，b表示效应B细胞，其中在培养基中添加的    成分筛选出    （a、aa、ab、bb、b）细胞进行培养，然后再筛选出    细胞进行大规模培养．
              （3）此过程生产的单克隆抗体可以与    特异性结合，从而诊断早孕．
              难度：中等
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            • 6． 下列有关酶工程与基因工程的叙述中正确的是（　　）
              A．酶工程是细胞水平（或性状水平）操作，基因工程是分子水平操作
              B．酶工程中通过层析提纯酶蛋白，基因工程中通过筛选获得受体细胞
              C．酶工程合成的是非天然存在的蛋白质，基因工程合成的是天然存在的蛋白质
              D．酶工程产品相对安全且应用广，基因工程产品安全性稍弱且可能影响生态环境
              难度：中等
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            • 7． 小鼠的某种抗体由轻链和重链组成，科学家将编码轻链和重链的基因分别导入两个不同的烟草植物体内，然后让两株植物进行杂交就能获得可同时编码轻链和重链两种多肽的植株，即合成小鼠抗体的转基因植物．回答下列问题：
              （1）若要获取小鼠的编码轻链和重链的基因，可以先提取小鼠浆细胞中编码两条链的mRNA，然后通过     过程获取小鼠的cDNA，并利用    技术对目的基因进行扩增．
              （2）在构建基因表达载体时，需要用到的工具酶有    ，基因表达载体中的目的基因两端的序列分别是    和    ．
              （3）用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞的过程中，常常将目的基因插入到农杆菌Ti质粒的    
              上．检测目的基因是否导入受体细胞可用DNA分子杂交技术，一般用标记的    作探针．
              （4）若想大规模培育能合成小鼠抗体的转基因植物，可采用    技术．
              难度：中等
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            • 8． 某科研机构研发的幽门螺杆菌疫苗为基因工程疫苗，对该菌引发的胃炎、胃溃疡等疾病具有较好的预防效果，其有效成分是该菌的一种表面抗原蛋白质，请回答下列问题．
              （1）要获得编码该菌表面抗原的基因，可提取出该菌的mRNA，并将mRNA    ．要大量获得表达特异抗原的基因，可采用    技术．
              （2）基因工程的核心步骤是构建    ，该结构除了抗原基因（目的基因）外，还必须有启动子、终止子以及    ．
              （3）目的基因进入受体细胞内，并且在变体细胞内稳定和表达的过程，称为    ．在表达过程中，启动子需与    识别和结合，从而驱动转录过程．最终翻译是否成功，常用的检测方法是    ．
              （4）与传统疫苗相比，基因疫苗不仅能在宿主体内较长时间存在，还可以诱导产生    （填“体液免疫”“细胞免疫”或“体液免疫和细胞免疫”）．基因疫苗是在基因治疗技术的基础上发展而来的．基因治疗是把    导入病人体内，使该基因表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的．
              难度：中等
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            • 9． （2016•天津模拟）科学家尝试使用Cre/loxP位点特异性重组系统，在检测目的基因导入成功后，删除转基因烟草细胞内的抗除草剂基因．其技术过程如图（图中的■代表基因前的启动子，启动子是基因（gene）的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度．启动子就像“开关”，决定基因的活动．）据图1回答：
              （1）loxP是一种只有34个碱基对构成的小型DNA片段，是有两个13个碱基对反向重复序列和中间间隔的8个碱基对序列共同组成，自身不会表达，插入质粒后也不影响原有基因的表达，其碱基序列如下：
              Cre酶能特异性地识别此序列并在箭头处切开loxP，其功能类似于基因工程中的    酶．从遗传学角度分析，Cre酶改变质粒产生的结果相当于可遗传变异中的    ．
              （2）将重组质粒导入到植物细胞后，通过    和    两个过程可以形成完整的植株．作为标记基因，抗除草剂基因用于检测目的基因是否导入成功的原理是    ．
              （3）经检测成功后，抗除草剂基因已没有用途，继续留在植物体内可能会造成的安全问题是    ．经Cre酶处理后，质粒中的两个loxP序列分别被切开后，可得到如上图右侧的这两个DNA分子．由于    的原因，抗除草剂基因不再表达，之后会在培养过程中消失．
              （4）loxP序列是有方向性的．如果经Cre酶处理后，发现抗除草剂基因反向连接在质粒-上，则原来质粒一中这两个loxP序列的方向是    ．
              A．两个都是正向       B．两个都是反向      C．一个正向一个反向      D．与方向无关．
              难度：中等
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            • 10． 生物学家利用基因工程技术通过生物反应器生产人的血清蛋白．请根据相关知识回答下列问题：
              （1）在基因工程的操作中的“分子手术刀”是    
              （2）在基因工程的操作中的“分子缝合针”是    
              （3）基因工程中最常用的运载体是    
              （4）人的基因在牛体内能表达，说明人和牛    ．
              难度：中等
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